[發(fā)明專(zhuān)利]一種基于PCR檢測(cè)汞離子的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110474425.6
• 申請(qǐng)日: 2021-04-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113088564B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-06-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊華林;周玉;張興平;彭宇;徐明明
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 長(zhǎng)江大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/682
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/682;C12Q1/6823
• 代理公司: 武漢智嘉聯(lián)合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 42231
• 代理人: 柏琳容

本發(fā)明公開(kāi)一種基于PCR檢測(cè)汞離子的方法，屬于汞離子檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。該方法，包括：S1、將含有多種不同已知濃度的汞離子溶液分別添加至緩沖液得到多種混合物；S2、加入外切核酸酶III繼續(xù)反應(yīng)；S3、向多個(gè)混合物中加入模板，dNTP，Taq聚合酶并進(jìn)行PCR反應(yīng)；S4、向PCR反應(yīng)后的多種混合物中分別加入SG I；S5、檢測(cè)加入SG I后的多種混合物的熒光信號(hào)，根據(jù)熒光信號(hào)與汞離子的已知濃度得到兩者的線性關(guān)系式；S6、將待測(cè)液與緩沖液混合進(jìn)行混合反應(yīng)，之后檢測(cè)待測(cè)液在529nm的熒光信號(hào)，結(jié)合步驟S5的線性關(guān)系式得到待測(cè)液中汞離子的濃度。該方法靈敏度高、對(duì)汞離子的選擇性好且回收率高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及汞離子檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于PCR檢測(cè)汞離子的方法。

背景技術(shù)

汞是一種環(huán)境污染物，在環(huán)境中它能以單質(zhì)，無(wú)機(jī)和有機(jī)形式存在。由于汞離子(Hg²⁺)分布范圍廣，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定且水溶性好，所以Hg²⁺是無(wú)機(jī)形式中不可忽略的一種形式。Hg²⁺能夠與蛋白質(zhì)的巰基形成強(qiáng)親和力的Hg-S鍵，從而導(dǎo)致呼吸道，胃腸道和神經(jīng)系統(tǒng)方面的疾病。汞離子還具有生物積累效應(yīng)，可以通過(guò)食物鏈進(jìn)入人體。因此，即使在低濃度下，它也可能對(duì)人類(lèi)健康造成嚴(yán)重的損害。世界衛(wèi)生組織規(guī)定飲用水中Hg²⁺的最高含量為30nM。因此，建立一種高靈敏度的Hg²⁺檢測(cè)方法十分迫切。到目前為止，已經(jīng)開(kāi)發(fā)了許多技術(shù)和方法來(lái)檢測(cè)Hg²⁺，這些方法大致分為儀器方法(例如電感耦合等離子體質(zhì)譜和原子吸收光譜法)，化學(xué)小分子探針，蛋白質(zhì)生物傳感器和DNA生物傳感器。其中，DNA生物傳感器因其具有高穩(wěn)定性，可以商業(yè)化生產(chǎn)和易于修改的優(yōu)點(diǎn)得到了更多關(guān)注。對(duì)于DNA生物傳感器檢測(cè)Hg²⁺來(lái)說(shuō)，提高其靈敏度一直是一個(gè)研究熱點(diǎn)。如何獲得檢測(cè)汞離子靈敏度高、選擇性好并且回收率高的方法是目前的一大難題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服上述技術(shù)不足，提供一種基于PCR檢測(cè)汞離子的方法，解決現(xiàn)有技術(shù)中在檢測(cè)汞離子時(shí)，不能同時(shí)兼顧靈敏度、選擇性和回收率的技術(shù)問(wèn)題。

為達(dá)到上述技術(shù)目的，本發(fā)明的技術(shù)方案提供一種基于PCR檢測(cè)汞離子的方法。

本發(fā)明提出一種檢測(cè)汞離子濃度的方法，包括以下步驟：

S1、將多種不同已知濃度的汞離子溶液分別添加至含有T7pro、T7terpro和Helper的緩沖液進(jìn)行混合反應(yīng)得到多種混合物；所述T7pro的序列為：TAATACGACTCACTATAGGGATTCTTTCTT；所述T7terpro的序列為：TGCTAGTTATTGCTCAGCGGATTCTTTCTT；所述Helper的序列為T(mén)TGTTTGTTTGGGG；

S2、分別向多種所述混合物中加入外切核酸酶III繼續(xù)反應(yīng)；

S3、向加入外切核酸酶III后的多種混合物中分別繼續(xù)加入模板，dNTP和Taq聚合酶并進(jìn)行PCR反應(yīng)；

S4、向進(jìn)行PCR反應(yīng)后的多種混合物中分別加入SG I；

S5、檢測(cè)加入SG I后的多種混合物的熒光信號(hào)，根據(jù)所述熒光信號(hào)與所述汞離子的已知濃度得到兩者的線性關(guān)系式；

S6、將待測(cè)液與所述含有T7pro、T7terpro和Helper的緩沖液混合進(jìn)行混合反應(yīng)，之后執(zhí)行步驟S2-S4，之后檢測(cè)所述待測(cè)液的熒光信號(hào)，結(jié)合步驟S5的線性關(guān)系式得到所述待測(cè)液中汞離子的濃度。

進(jìn)一步地，在步驟S1中，進(jìn)行所述混合反應(yīng)的溫度為35-37℃，進(jìn)行所述混合反應(yīng)的時(shí)間為40-60min。

進(jìn)一步地，在步驟S2中，反應(yīng)的溫度為35-37℃。

進(jìn)一步地，在步驟S2中，反應(yīng)的時(shí)間為20-30min。