[發明專利]一種基于PCR檢測汞離子的方法

有效

• 申請號: 202110474425.6
• 申請日: 2021-04-29
• 公開（公告）號: CN113088564B
• 公開（公告）日: 2022-06-21
• 發明（設計）人: 楊華林;周玉;張興平;彭宇;徐明明
• 申請（專利權）人: 長江大學
• 主分類號: C12Q1/682
• 分類號: C12Q1/682;C12Q1/6823
• 代理公司: 武漢智嘉聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 42231
• 代理人: 柏琳容

1.一種基于PCR檢測汞離子的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、將多種不同已知濃度的汞離子溶液分別添加至含有T7pro、T7terpro和Helper的緩沖液進行混合反應得到多種混合物；所述T7pro的序列為：TAATACGACTCACTATAGGGATTCTTTCTT；所述T7terpro的序列為：TGCTAGTTATTGCTCAGCGGATTCTTTCTT；所述Helper的序列為TTGTTTGTTTGGGG；

S2、分別向多種所述混合物中加入外切核酸酶III繼續反應；

S3、向加入外切核酸酶III后的多種混合物中分別繼續加入模板，dNTP和Taq聚合酶并進行PCR反應；

S4、向進行PCR反應后的多種混合物中分別加入SGI；

S5、檢測加入SGI后的多種混合物的熒光信號，根據所述熒光信號與所述汞離子的已知濃度得到兩者的線性關系式；

S6、將待測液與所述含有T7pro、T7terpro和Helper的緩沖液混合進行混合反應，之后執行步驟S2-S4，之后檢測所述待測液的熒光信號，結合步驟S5的線性關系式得到所述待測液中汞離子的濃度。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟S1中，進行所述混合反應的溫度為35-37℃，進行所述混合反應的時間為40-60min。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟S2中，反應的溫度為35-37℃。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，在步驟S2中，反應的時間為20-30min。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟S3中，加入所述SGI后進行反應的溫度為35-37℃。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，在步驟S3中，加入所述SG I后進行反應的時間為30-40min。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟S1中，所述緩沖液為Tris-HCl緩沖液。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟S3中，所述模板為pET28a質粒。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟S5中，所述線性關系式為Y＝5473580+703818.26373X，其中Y為熒光信號，X為汞離子濃度。

10.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟S5中，檢測加入SGI后的多種所述混合物在529nm處的熒光信號。