[發(fā)明專利]一種檢測EGFR基因G719S突變的系統(tǒng)

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110474207.2
• 申請日: 2021-04-29
• 公開（公告）號: CN113136431A
• 公開（公告）日: 2021-07-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉飛;馮攀;張立群;蒲曉允;項貴明;郭銘靜
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學第二附屬醫(yī)院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/686
• 代理公司: 重慶強大凱創(chuàng)專利代理事務所(普通合伙) 50217
• 代理人: 陳雍

本發(fā)明涉及分子診斷技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測EGFR基因G719S突變的系統(tǒng)，包括微流控芯片和PCR擴增體系；所述微流控芯片包括設(shè)有若干用于進行PCR反應的微腔室的PDMS腔室層；所述PDMS腔室層的原料包括PDMS預聚體和Triton X?100；所述PCR擴增體系包括牛血清白蛋白。本方案解決了現(xiàn)有檢測技術(shù)靈敏度有限且操作繁瑣的技術(shù)問題。本技術(shù)在檢測稀有基因突變方面具有非常突出的優(yōu)勢，可高敏特異地檢測游離核酸的突變位點，同時該技術(shù)還具有成本低廉、快速判讀、操作較易等優(yōu)點。本方案可以應用于檢測EGFR基因G719S突變的實踐操作中，為分子靶向的肺癌精準醫(yī)療和診斷創(chuàng)造條件。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子診斷技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測EGFR基因G719S突變的系統(tǒng)。

背景技術(shù)

肺癌(Lung Cancer)是世界主要的惡性腫瘤之一，全球每年新發(fā)病例高達160萬余人次，患者5年生存率僅為16～23％，發(fā)病率逐年遞增，嚴重威脅人類生命財產(chǎn)安全。隨著精準醫(yī)療的興起和技術(shù)進步，以分子靶向治療為代表的肺癌精準醫(yī)療近年來異軍突起；逐漸成為治療的一線新選擇。生物靶向治療和診斷可對肺癌進行深層次分子分型，從而實現(xiàn)精準化治療。與肺癌精準醫(yī)療密切相關(guān)的靶點有表皮生長因子受體(Epidermal GrowthFactor Receptor，EGFR)，約40％的亞洲非小細胞肺癌(NSCLC)患者存在EGFR突變，G719S就是其中之一，EGFR的G719S占EGFR突變的15％。

目前，存在多種多樣的肺癌分子分型和位點突變檢測技術(shù)，主流方法有直接測序法、液相色譜、高分辨率熔解曲線法、擴增阻遏突變技術(shù)和免疫組化等。這些技術(shù)在基因突變檢測中能發(fā)揮各自優(yōu)勢，但也存在種種不足。如測序法最為精準，是“金標準”，但存在操作繁瑣、分析復雜、費用高昂等缺陷；液相色譜靈敏度不足，難以達到精準的要求；免疫組化在臨床應用最為廣泛，但費時費力且試劑有一定毒性；其他方法也存在諸如背景信號強、信號干擾或通量不高的缺點。因此，亟需開發(fā)一種操作較為簡易、費用低廉、靈敏特異的靶向基因突變檢測的新技術(shù)和新體系。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明意在提供一種檢測EGFR基因G719S突變的系統(tǒng)，以解決對基因突變的現(xiàn)有的檢測技術(shù)的靈敏度有限且操作繁瑣的技術(shù)問題。

為達到上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種檢測EGFR基因G719S突變的系統(tǒng)，包括微流控芯片和PCR擴增體系；所述微流控芯片包括PDMS腔室層，所述PDMS腔室層設(shè)有若干用于進行PCR反應的微腔室；所述PDMS腔室層的原料包括PDMS預聚體和Triton X-100；所述PCR擴增體系包括牛血清白蛋白。

本方案的原理及優(yōu)點是：在含有EGFR基因G719S點突變的樣本中，微量突變DNA與大量野生型DNA共存，導致常規(guī)的方法很難將微量的突變基因檢測出來。本方案使用數(shù)字聚合酶鏈式反應(數(shù)字PCR)的方法來檢測EGFR基因G719S點突變，即采取“分而治之”的策略，通過將試樣均勻分解或分隔為大量的反應單元(即將PCR擴增體系分解到微腔室中)，直至每個微腔室中平均有一個或零個靶標分子，從而有效地避免了常規(guī)PCR擴增體系下，由于微量突變DNA與大量野生型DNA共存而導致微量突變DNA的擴增受到抑制無法檢測到的情況。在數(shù)字PCR擴增體系下，當所有分隔的反應單元同時進行擴增后，含有靶標分子的單元將會因靶標分子擴增產(chǎn)生陽性信號，而不含靶標分子的單元則沒有信號，最后通過對陽性信號進行統(tǒng)計計數(shù)，并根據(jù)泊松分布公式計算，可以推算出樣品的原始濃度或靶標分子含量。該技術(shù)為一種絕對定量技術(shù)，可確定低至單拷貝的待測靶分子的絕對數(shù)目。因此該技術(shù)在檢測稀有基因突變方面具有非常突出的優(yōu)勢，可高敏特異地檢測循環(huán)游離核酸的靶向基因突變位點，同時該技術(shù)還具有成本低廉、快速判讀、操作較易等優(yōu)點。