[發明專利]一種檢測EGFR基因G719S突變的系統

在審

• 申請號: 202110474207.2
• 申請日: 2021-04-29
• 公開（公告）號: CN113136431A
• 公開（公告）日: 2021-07-20
• 發明（設計）人: 劉飛;馮攀;張立群;蒲曉允;項貴明;郭銘靜
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍陸軍軍醫大學第二附屬醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/686
• 代理公司: 重慶強大凱創專利代理事務所(普通合伙) 50217
• 代理人: 陳雍

1.一種檢測EGFR基因G719S突變的系統，其特征在于：包括微流控芯片和PCR擴增體系；所述微流控芯片包括PDMS腔室層，所述PDMS腔室層設有若干用于進行PCR反應的微腔室；所述PDMS腔室層的原料包括PDMS預聚體和Triton X-100；所述PCR擴增體系包括牛血清白蛋白。

2.根據權利要求1所述的一種檢測EGFR基因G719S突變的系統，其特征在于：Triton X-100的質量為PDMS預聚體的質量的0.5％。

3.根據權利要求2所述的一種檢測EGFR基因G719S突變的系統，其特征在于：所述牛血清白蛋白的濃度為0.1-0.8mg/mL。

4.根據權利要求3所述的一種檢測EGFR基因G719S突變的系統，其特征在于：所述PCR擴增體系的引物包括序列如SEQ ID NO.1所示的正向引物和如SEQ ID NO.2所示的反向引物。

5.根據權利要求4所述的一種檢測EGFR基因G719S突變的系統，其特征在于：所述PCR擴增體系還包括探針；所述探針包括序列如SEQ ID NO.3所示的突變型探針和序列如SEQ IDNO.4所示的野生型探針；所述探針的5’端連接有熒光報告基團，3’端連接有熒光淬滅基團。

6.根據權利要求5所述的一種檢測EGFR基因G719S突變的系統，其特征在于：所述突變型探針的第七位堿基為鎖核酸修飾堿基，所述野生型探針的第六位堿基為鎖核酸修飾堿基；所述突變型探針的熒光報告基團為FAM，熒光淬滅基團為MGB；所述野生型探針的熒光報告基團為HEX，熒光淬滅基團為MGB。

7.根據權利要求6所述的一種檢測EGFR基因G719S突變的系統，其特征在于：所述PCR擴增體系的正向引物和反向引物的濃度均為0.1-1.0μmol/L；突變型探針和野生型探針的濃度均為0.1-0.5μmol/L。

8.根據權利要求7所述的一種檢測EGFR基因G719S突變的系統，其特征在于：PCR擴增體系的Tm值為55-58℃。

9.根據權利要求8所述的一種檢測EGFR基因G719S突變的系統，其特征在于：系統靈敏度為3.01copies/μL。

10.根據權利要求1所述的一種檢測EGFR基因G719S突變的系統，其特征在于：所述微腔室的深度為60μm，微腔室的橫截面為正六邊形，正六邊形的對邊之間的距離為40μm。