[發(fā)明專利]類風(fēng)濕因子IgG、IgM、IgA復(fù)合質(zhì)控品及其制備方法、應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110474091.2
• 申請日: 2021-04-29
• 公開（公告）號: CN113234154B
• 公開（公告）日: 2022-04-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳鑫;潘敬梅;秦楓;黃敬雙;曹長春;王健;張小飛;顏松;周玥;張偉
• 申請（專利權(quán)）人: 四川攜光生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;G01N33/68
• 代理公司: 成都行之專利代理事務(wù)所(普通合伙) 51220
• 代理人: 唐邦英

本發(fā)明公開了類風(fēng)濕因子IgG、IgM、IgA復(fù)合質(zhì)控品及其制備方法、應(yīng)用，制備方法為通過用類風(fēng)濕因子抗原免疫小鼠獲得小鼠RF抗體，通過抗體氨基酸序列測序得到小鼠RF抗體的可變區(qū)氨基酸序列，通過序列設(shè)計(jì)和全基因合成RF抗體可變區(qū)?人IgA恒定區(qū)?人IgM恒定區(qū)并聯(lián)堿基序列，并將序列引入含有人IgG Fc片段基因表達(dá)序列的pFUSE?hIgG1?Fc2載體中，制備同時(shí)含有人IgG、IgM、IgA Fc段和RF抗體可變區(qū)的重組質(zhì)粒，將該重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK293哺乳細(xì)胞，獲取同時(shí)含有人IgG、IgM、IgA Fc段和RF抗體可變區(qū)的重組抗體，將該重組抗體配制為質(zhì)控品，可同時(shí)用于RF?IgG、RF?IgM、RF?IgA及RF?IgG/M/A四類檢測試劑盒，其均一性、精密性和穩(wěn)定性較好，既方便了臨床操作，又極大的節(jié)約了成本，也極大的控制了質(zhì)控品間的批間差。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及體外診斷技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及類風(fēng)濕因子IgG、IgM、IgA復(fù)合質(zhì)控品及其制備方法、應(yīng)用。

背景技術(shù)

類風(fēng)濕因子(rheumatoid factor，RF)是一種抗人或動物IgG分子Fc片段抗原決定簇的抗體，是以變性IgG為靶抗原的自身抗體。類風(fēng)濕因子一般分為IgM型、IgG型和IgA型。類風(fēng)濕因子(RF)是美國風(fēng)濕病學(xué)會1987規(guī)定的經(jīng)典診斷類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)的標(biāo)準(zhǔn)之一。類風(fēng)濕因子陽性患者較多伴有關(guān)節(jié)外表現(xiàn)，如皮下結(jié)節(jié)及血管炎等。到目前為止，對疑似RA患者最常用的血清學(xué)檢測除了常規(guī)炎癥參數(shù)外，主要是類風(fēng)濕因子RF。RA患者中有70％～80％可以檢測到RF，RF陰性的RA占20％～30％。通常與高濃度的類風(fēng)濕因子相關(guān)疾病有類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA),Sjogren綜合征。此外，它還被發(fā)現(xiàn)與系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)，多肌炎，系統(tǒng)性硬化癥，混合性結(jié)締組織病(MCTD)，冷球蛋白血癥，干燥綜合癥(SS)有關(guān)。

目前市場上檢測RF的試劑盒主要有四個(gè)大類，RF抗體IgG試劑盒、RF抗體IgM檢測試劑盒、RF抗體IgA檢測試劑盒和RF抗體IgG/M/A檢測試劑盒，臨床上常規(guī)檢查的RF主要是IgM-RF，其敏感性高，但是對RA的診斷特異性較低，正常人亦可出現(xiàn)2％-5％的陽性率。IgG-RF在關(guān)節(jié)軟骨表面的沉積可激活補(bǔ)體引起關(guān)節(jié)的炎性損傷，因此RF IgG在RA患者血清或滑膜液中出現(xiàn)與患者的滑膜炎、血管炎的癥狀密切相關(guān)。IgA-RF是RA臨床活動的一項(xiàng)指標(biāo)，效價(jià)與患者關(guān)節(jié)炎癥狀和嚴(yán)重程度以及骨質(zhì)破壞程度有顯著的相關(guān)性。臨床上3種RF同時(shí)檢測較一般單一IgM-RF檢測更能全面反映RA的臨床情況，對診斷RA、判斷RA活動程度，治療效果和預(yù)后具有重要意義。

RF常用的免疫檢測方法有酶聯(lián)免疫吸附分析技術(shù)(ELISA)和化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)(CLIA)，磁微粒化學(xué)發(fā)光技術(shù)是以化學(xué)發(fā)光劑為底物的酶免疫技術(shù)，同時(shí)應(yīng)用了納米級磁性微粒做固相載體，增加了吸附面積，使抗原、抗體最大限度結(jié)合，并使其結(jié)合反應(yīng)在近似液相的條件下進(jìn)行，兼具化學(xué)發(fā)光與酶免疫技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)，是近幾年快速發(fā)展的非放射性檢測方法。質(zhì)控品作為化學(xué)發(fā)光試劑的重要組成部分，主要作用是監(jiān)控整個(gè)檢測系統(tǒng)的狀態(tài)，確認(rèn)樣本檢測在檢測系統(tǒng)正常狀態(tài)下進(jìn)行，對檢測結(jié)果是否準(zhǔn)確提供非常重要的參考作用。

而現(xiàn)有的RF質(zhì)控品多為動物源性血清，在現(xiàn)有的技術(shù)條件下的質(zhì)控品中IgG、IgM和IgA批間差較難控制，且生產(chǎn)及儲存成本更高。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供類風(fēng)濕因子IgG、IgM、IgA復(fù)合質(zhì)控品及其制備方法，通過本發(fā)明所述方法制備的復(fù)合質(zhì)控品解決現(xiàn)有RF質(zhì)控品批間差難控制的問題，且穩(wěn)定性較好。

此外，本發(fā)明還提供上述類風(fēng)濕因子IgG、IgM、IgA復(fù)合質(zhì)控品的應(yīng)用。

本發(fā)明通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

類風(fēng)濕因子IgG、IgM、IgA復(fù)合質(zhì)控品的制備方法，包括以下步驟：

S1、分別獲取小鼠RF抗體的可變區(qū)基因序列、人IgM恒定區(qū)基因序列和人IgA恒定區(qū)基因序列，小鼠RF抗體的可變區(qū)基因序列如SEQ ID No.2所示，其氨基酸序列如SEQ IDNo.4所示；