[發明專利]一種脂聯素抗體納米膠乳顆粒及用于檢測脂聯素的試劑盒

有效

• 申請號: 202110473326.6
• 申請日: 2021-04-29
• 公開（公告）號: CN113267635B
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發明（設計）人: 徐愛民;鐘鈴;周鵬程;賴華
• 申請（專利權）人: 廣東優尼德生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N33/543;G01N33/577;G01N33/546
• 代理公司: 廣州市科豐知識產權代理事務所(普通合伙) 44467
• 代理人: 羅嘯秋

本發明屬于醫學檢測試劑領域，公開了一種脂聯素抗體納米膠乳顆粒及用于檢測脂聯素的試劑盒。將膠乳微球經聚乙二醇表面改性和鏈親和素包被，得到聚乙二醇表面改性及鏈親和素包被的膠乳微球；將脂聯素抗體與生物素混合反應，得到生物素化脂聯素抗體；然后將聚乙二醇表面改性及鏈親和素包被的膠乳微球與生物素化脂聯素抗體混合孵育，得到脂聯素抗體納米膠乳顆粒。所述檢測脂聯素的試劑盒包括脂聯素標準品、R1試劑和R2試劑，其中R1試劑包含電解質、促凝劑、表面活性劑、防腐劑和緩沖液，R2試劑包含脂聯素抗體納米膠乳顆粒、電解質、表面活性劑、防腐劑和緩沖液。本發明的脂聯素檢測試劑盒具有顯著提高的靈敏度、穩定性及檢測效率。

技術領域

本發明屬于醫學檢測試劑領域，具體涉及一種脂聯素抗體納米膠乳顆粒及用于檢測脂聯素的試劑盒。

背景技術

脂聯素(Adiponectin/ADPN)是脂肪細胞分泌的一種內源性生物活性多肽或蛋白質，大量存在于血液循環中，在調節胰島素敏感性及葡萄糖代謝的過程中扮演重要角色，是一種胰島素增敏激素(AnInsulin-sensitizingHormone)。人體內的脂聯素由244個氨基酸組成，分子量為30KD，由氨基末端的分泌信號序列(aa1-18)，一段特異序列(aa19-41)，一組由22個氨基酸組成的膠原重復序列(aa42-107)，一段球狀序列(aa108-244)組成。其中球狀區是脂聯素生物活性的關鍵部位，和TNF-α的結構相似，脂聯素與膠原Ⅷ、X和補體C1q高度同源。脂聯素的單聚體和三聚體是其生物活性形式或受體親和配基可以特異性結合骨骼肌或肝臟細胞膜上的G蛋白藕聯受體一型或二型脂聯素受體，進而調節脂肪酸氧化和糖代謝。在代謝性疾病中，脂聯素具有抗糖尿病、抗動脈粥樣硬化及抗炎癥等功能。大量流行病學調查顯示，血清/血漿中脂聯素水平與胰島素抵抗、糖尿病前期及2型糖尿病密切相關，脂聯素水平在上述疾病中明顯降低。了解血清/血漿中脂聯素水平與糖尿病、糖尿病前期的關聯可以為疾病提供有價值的信息，促進對糖尿病高發人群的跟蹤隨訪及干預治療，從而實現對糖尿病高風險人群的早發現、早干預、早治療，降低糖尿病發病率。

脂聯素的檢測方法主要包括：酶聯免疫分析法，放射免疫分析法，化學發光法等。酶聯免疫分析法靈敏度高，但操作繁瑣，難于實現全自動化檢測；放射免疫分析法會對對操作人員產生危害，對環境造成污染；而化學發光法也存在操作繁瑣成本高、儀器普及率低等缺點。這些缺點限制了現有脂聯素檢測方法的推廣及應用，使其難于廣泛的應用于科研及臨床。

膠乳免疫增強比濁法是近年來出現的一種較為快速、準確、穩定的液相免疫比濁檢測方法。其基本原理是利用抗原抗體特異性結合，產生免疫沉淀反應引起液相濁度變化，來檢測抗原的濃度。在一定范圍內，抗原的濃度越高，免疫沉淀反應就越快，液相吸光度變化也越大。該技術通過采用納米乳膠微球偶聯特異性抗體，使抗原抗體形成的免疫沉淀物體積增大，從而放大檢測信號，顯著提高了檢測的靈敏度。由此可見，用于制備檢測脂聯素的試劑盒的關鍵成分在于脂聯素抗體納米膠乳顆粒。其他輔助成分還包括為了維持反應體系pH值穩定性的生物緩沖劑；能夠絡合檢測樣本中的金屬離子，以減少金屬離子對檢測結果影響的螯合劑；為了防止微生物的繁殖對產品品質及檢測結果帶來不良影響的防腐劑；保護抗體的活性及防止膠乳顆粒的凝集、下沉，同時還可以增加試劑盒中各組分的穩定性，延長產品的貨架期及開瓶后使用時間的穩定劑；促進試劑體系中各組分以及檢測樣本中各物質的均勻分散及提高檢測的精密度，同時減少樣本濁度對測定結果影響的表面活性劑；可以促進抗原抗體反應，有利于膠乳顆粒交聯物的形成和增大，提高檢測靈敏度和線性范圍的促凝劑；與膠乳顆粒中游離的活性位點結合，避免游離的活性位點對檢測結果造成不良影響的封閉劑；能維持體系中各物質有一個良好的分散狀態，防止各組分凝集下沉導致的檢測試劑盒的品質及開瓶穩定性變差等問題出現的助懸劑；為了保護抗體的活性，避免抗體失活對試劑盒的品質帶來不良影響的保護劑等。