[發明專利]一種脂聯素抗體納米膠乳顆粒及用于檢測脂聯素的試劑盒

有效

• 申請號: 202110473326.6
• 申請日: 2021-04-29
• 公開（公告）號: CN113267635B
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發明（設計）人: 徐愛民;鐘鈴;周鵬程;賴華
• 申請（專利權）人: 廣東優尼德生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N33/543;G01N33/577;G01N33/546
• 代理公司: 廣州市科豐知識產權代理事務所(普通合伙) 44467
• 代理人: 羅嘯秋

1.一種用于檢測脂聯素的試劑盒，其特征在于：由脂聯素標準品、R1試劑和R2試劑構成，其中R1試劑由電解質、促凝劑聚乙二醇4000~10000、表面活性劑、防腐劑和緩沖液構成，所述R2試劑由脂聯素抗體納米膠乳顆粒、電解質、表面活性劑、防腐劑和緩沖液構成；

所述脂聯素抗體納米膠乳顆粒通過如下方法制備得到：

（1）膠乳微球的聚乙二醇表面改性及鏈親和素包被：將活性膠乳微球分散于水中，加入酸性催化劑和聚乙二醇攪拌混合均勻，再加入戊二醛進行表面改性反應，得到聚乙二醇表面改性膠乳微球；然后加入鏈親和素繼續混合孵育，得到聚乙二醇表面改性及鏈親和素包被的膠乳微球；

（2）脂聯素抗體的生物素化：將生物素與脂聯素抗體混合反應，得到生物素化脂聯素抗體；

（3）脂聯素抗體納米膠乳顆粒的制備：將步驟（1）所得聚乙二醇表面改性及鏈親和素包被的膠乳微球與步驟（2）的生物素化脂聯素抗體混合孵育，得到脂聯素抗體納米膠乳顆粒；

步驟（1）中所述活性膠乳微球是指殼聚糖微球；活性膠乳微球的粒徑范圍為100～500nm；所述酸性催化劑是指鹽酸；所述聚乙二醇的平均分子量為800~6000，聚乙二醇加入量為活性膠乳微球質量的1%~10%；所述表面改性反應的溫度為20~40℃，時間為1~8h；

所述殼聚糖微球通過如下方法制備得到：

將殼聚糖溶解于醋酸溶液中得到殼聚糖水相溶液，然后加入到含有表面活性劑的有機溶劑中，攪拌乳化后加入戊二醛交聯反應，產物經分離、洗滌、冷凍干燥，得到殼聚糖微球。

2.根據權利要求1所述的一種用于檢測脂聯素的試劑盒，其特征在于：所述醋酸溶液的濃度為0.1~0.5 mol/L，所述表面活性劑是指Span-80，所述有機溶劑是指環己烷，所述水相溶液與油相有機溶劑的體積比為1:2~4。

3.根據權利要求1或2所述的一種用于檢測脂聯素的試劑盒，其特征在于：步驟（2）中所述生物素與脂聯素抗體混合的摩爾比為1:1~5；所述脂聯素抗體是指抗人脂聯素單克隆抗體或抗人脂聯素多克隆抗體。

4.根據權利要求1或2所述的一種用于檢測脂聯素的試劑盒，其特征在于：步驟（3）中所述聚乙二醇表面改性及鏈親和素包被的膠乳微球與生物素化脂聯素抗體混合孵育的質量比為1:2~2:1。

5.根據權利要求1所述的一種用于檢測脂聯素的試劑盒，其特征在于：所述電解質選自氯化鈉，質量濃度為0.5%～2％；所述促凝劑的質量濃度為0.1%～5%；所述表面活性劑選自吐溫、脂肪醇聚氧乙烯醚、聚氧乙烯烷基苯基醚中的至少一種，質量濃度為0.2%～5%；所述防腐劑選自疊氮鈉、苯酚、對羥基苯甲酸、對羥基苯甲酸乙酯、Proclin系列防腐劑中的至少一種，質量濃度為0.1%～0.5%；所述緩沖液選自MES緩沖液、MOPS緩沖液、硼酸緩沖液、醋酸鹽緩沖液、磷酸緩沖液或甘氨酸緩沖液，濃度為50～300mmol/L；所述R2試劑中脂聯素抗體納米膠乳顆粒的濃度為0.5~4 mg/mL。