[發明專利]基于組蛋白去乙?；敢种苹钚哉T導調節性B細胞高效擴增的試劑及其應用

在審

• 申請號: 202110472816.4
• 申請日: 2021-04-29
• 公開（公告）號: CN113136365A
• 公開（公告）日: 2021-07-20
• 發明（設計）人: 孫建波;鄒發貴
• 申請（專利權）人: 中山大學附屬口腔醫院
• 主分類號: C12N5/0781
• 分類號: C12N5/0781;A61K35/17;A61P29/00;A61P37/02;A61P1/00;A61P19/02
• 代理公司: 北京細軟智谷知識產權代理有限責任公司 11471
• 代理人: 劉靜榮

本發明屬于細胞生物學領域，具體涉及基于組蛋白去乙?；敢种苹钚哉T導調節性B細胞高效擴增的試劑及其應用。本發明的誘導調節性B細胞高效擴增的試劑，包括刺激物和誘導物，其中，刺激物為LPS、CD40抗體或CpG中的至少一種，誘導物為組蛋白去乙?；敢种苿?。本發明基于組蛋白去乙酰化酶抑制活性聯合B細胞刺激物體外誘導調節性B細胞并高效擴增，使得Breg細胞在體外培養的脾臟細胞或PBMC細胞中的比例顯著增加且不喪失其抑制體內外免疫反應的功能，從而可通過過繼輸入方式治療類風濕性關節炎和腸炎等炎癥或自身免疫疾病病人。

技術領域

本發明屬于細胞生物學領域，具體涉及基于組蛋白去乙酰化酶抑制活性誘導調節性B細胞高效擴增的試劑及其應用。

背景技術

B細胞通過產生抗體、展示抗原和分泌促炎及抑炎性因子在促、控炎癥兩個方面均有重要作用。在牙周炎癥組織中，B細胞有促進牙周炎發展的作用。B細胞在類風濕性關節炎(RA)中起重要作用，不光分泌“類風濕因子”，還能分泌促炎細胞因子來促進RA的發生和發展。B細胞也是一種抗原呈遞細胞，可通過HLA-DR4和抗原特異性T細胞結合，刺激其產生TNF-α并激活巨噬細胞，在RA中表現異常。B細胞還可抑制免疫反應，該類細胞被稱為調節性B細胞(Breg)，其主要亞群為產IL-10型Breg(B10)。Breg不僅在維持靜息狀態下的外周耐受中發揮作用,而且對于抑制正在進行的免疫反應、重建自身免疫性耐受至關重要。牙周炎患者炎癥牙齦組織中B10細胞的數量顯著高于健康牙齦組織。類風濕性關節炎(RA)病人的B10明顯異常，不光數量減少而且功能減弱，提示Breg可能是牙周炎參與RA發病的關鍵免疫細胞。

現有技術表明Breg能抑制牙周炎細胞因子的表達和減少牙槽骨吸收，Breg細胞經靜脈注射后在牙齦組織中顯著增加并抑制牙周炎，LPS在與CpG聯用時能夠增加體外培養的CD1d⁺CD5⁺Breg的百分比。過繼輸入Breg細胞也可減輕實驗性RA的發展。此外，通過動物實驗，Breg細胞過繼輸入治療接觸超過敏反應(CHS)、炎癥性腸炎、系統性紅斑狼瘡(SLE)和模擬硬皮病的實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)等其他炎癥性和自身免疫性疾病方面都展示出來顯著療效，提示其廣闊的臨床應用前景。體外擴增Breg細胞是過繼療法必須解決的技術，因為人外周血中B細胞比例很低，體外擴增Breg細胞顯得尤為重要。

雖然B細胞的體外培養技術已經建立，Breg細胞的體外誘導使其比例顯著上升以及在體外高效擴增的技術仍有待開發。

發明內容

本發明的目的在于提供一種誘導調節性B細胞高效擴增的試劑。

本發明的再一目的在于提供上述誘導調節性B細胞高效擴增的試劑的應用。

根據本發明具體實施方式的誘導調節性B細胞高效擴增的試劑，所述試劑包括刺激物和誘導物，其中，刺激物為LPS、CD40抗體或CpG中的至少一種，誘導物為組蛋白去乙?；敢种苿?。

脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)是革蘭氏陰性細菌細胞壁外壁的組成成分，是一種內毒素(Endotoxin)，當其作用于人類或動物等其他生物細胞時，就會表現出多種的生物活性。

CPG ODN(CpG oligonucleotide,CpG寡脫氧核苷酸)是人工合成的含有非甲基化的胞嘧啶鳥嘌呤二核苷酸(CpG)的寡脫氧核苷酸(ODN)，可模擬細菌DNA刺激多種哺乳動物包括人的免疫細胞。

組蛋白去乙?；敢种苿?HDACi)，有干擾組蛋白去乙?；傅墓δ?。HDACi按其結構分為4類：一、脂肪酸，如乙酸鹽、丙酸鹽、丁酸鹽、戊酸鹽、丁酸苯酯和丙戊酸；二、氧肟酸鹽，如TSA是被發現的第1個能抑制HDACs的天然氧肟酸，SAHA與TSA結構相似，是食品藥品管理局批準的第一個可以用于臨床的制劑；三、環肽，如天然產物縮酚酸肽FK-228、apicidin和環氧肟酸；四、苯酰胺類，如MS-275、MGCD0103。