[發明專利]一種蠟樣芽孢桿菌免疫膠體金快速檢測試紙條及其制備方法

在審

• 申請號: 202110472002.0
• 申請日: 2021-04-29
• 公開（公告）號: CN113341137A
• 公開（公告）日: 2021-09-03
• 發明（設計）人: 王英林;張聞桐;劉程;方水琴;田亞晨;吳美嬌;吳有雪;劉濤;楊昊;李斌;吳婭芳;姜嘉燁;黃笑天;劉箐
• 申請（專利權）人: 上海理工大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/577;G01N33/58;G01N33/558;G01N33/532;B22F9/24;B22F1/00;B82Y40/00;B82Y30/00
• 代理公司: 上海邦德專利代理事務所(普通合伙) 31312
• 代理人: 王文娟

本發明公開了一種蠟樣芽孢桿菌免疫膠體金快速檢測試紙條，包括：PVC底板、設置于所述PVC底板上的樣品墊、與所述樣品墊相鄰設置的結合墊及與所述結合墊相鄰設置的吸水墊；所述結合墊與PVC底板之間設置有硝酸纖維素膜層，所述結合墊上設置有檢測線與質控線。根據本發明，可用于檢測蠟樣芽孢桿菌的免疫原，檢測的靈敏度高。

技術領域

本發明涉及微生物檢測的技術領域，特別涉及一種蠟樣芽孢桿菌免疫膠體金快速檢測試紙條。

背景技術

蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)是一種革蘭氏陽性菌，可引起人和動物患病。據國家食源性疾病監測網的數據分析，我國每年發生數十起蠟樣芽孢桿菌食物中毒事件，約占細菌性食物中毒事件總數的11.4％，造成數百人發病，而這個數字可能遠低于實際發生中毒的人數。蠟樣芽孢桿菌感染可引起惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉等，嚴重者可引起電解質紊亂、出血性腹瀉。該致病菌主要存在于米制品、肉制品、乳制品等成品及其半成品中。在食物的生產、加工和運輸中，由于交叉感染，易導致蠟樣芽孢桿菌感染事件的大規模爆發。因此，蠟樣芽孢桿菌的檢測至關重要。

目前，蠟樣芽孢桿菌檢測主要依賴于國標規定的傳統培養法及生化鑒定，其被視為蠟樣芽孢桿菌檢測的金標準，但是，檢測周期長、操作繁瑣，不適合大量樣品的檢測。此外，實驗室常用的聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction，PCR)進行蠟樣芽孢桿菌的檢測，其靈敏度高，但是依賴專業的設備和操作人員且操作時間較長。免疫學檢測由于其檢測周期短、操作簡便、靈敏度較高，近年來成為發展迅速的檢測手段。但是，我國目前尚未擁有可以用于蠟樣芽孢桿菌快速檢測的產品。

發明內容

針對現有技術中存在的不足之處，本發明的目的是提供一種蠟樣芽孢桿菌免疫膠體金快速檢測試紙條，可用于檢測蠟樣芽孢桿菌的免疫原，檢測的靈敏度高。為了實現根據本發明的上述目的和其他優點，提供了一種蠟樣芽孢桿菌免疫膠體金快速檢測試紙條，包括：

PVC底板、設置于所述PVC底板上的樣品墊、與所述樣品墊相鄰設置的結合墊及與所述結合墊相鄰設置的吸水墊；

所述金標墊與襯墊之間設置有硝酸纖維素膜層；

所述結合墊上設置有檢測線與質控線。

優選的，所述檢測線及質控線設置于所述硝酸纖維素膜層上，且檢測線靠近樣品墊，質控線靠近吸水墊。

優選的，所述檢測線和結合墊上膠體金標記的單克隆體抗體，其單克隆抗體由保藏號為2B9的雜交瘤細胞株分泌產生，所述質控線由羊抗鼠抗體構成。

優選的，所述與膠體金偶聯的單克隆體抗體中的制備的膠體金粒徑為30-40nm，膠體金與單抗的質量體積比為36μg/mL，膠體金偶聯抗體和構成檢測線的抗體為同一單克隆抗體。

一種蠟樣芽孢桿菌免疫膠體金快速檢測試紙條的制備方法，包括以下步驟：

S1、進行膠體金的制備；

S2、確定膠體金標記抗體最優pH；

S3、確定膠體金偶聯抗體的最佳結合量；

S4、對抗體進行膠體金標記；

優選的，所述步驟S1包括：

S11、取氯金酸粉末加入滅過菌的雙蒸水，配成氯金酸溶液；

S12、取二合水檸檬酸三鈉，溶解到，雙蒸水中配成檸檬酸三鈉溶液，現配現用；

S13、雙蒸水的燒瓶中，調節磁力攪拌器溫度到150℃，攪拌速率為500rpm，加熱至沸騰，立即加入氯金酸，沸騰15s，充分攪拌同時迅速加入1％的檸檬酸三鈉，停止加熱，冷卻至室溫，分裝后避光保存。