[發明專利]一種測定蔬菜中硒形態含量的方法

有效

• 申請號: 202110470129.9
• 申請日: 2021-04-28
• 公開（公告）號: CN113189233B
• 公開（公告）日: 2023-03-10
• 發明（設計）人: 魏益華;張金艷;戴廷燦;邱素艷;涂田華
• 申請（專利權）人: 江西省農業科學院農產品質量安全與標準研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/14;G01N30/30;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/74;G01N30/86;G01N21/64
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產權代理有限公司 11250
• 代理人: 張琳琳

本發明公開一種測定蔬菜中硒形態含量的方法，所述方法使用離子對反相高效液相色譜?紫外?氫化物發生?原子熒光光譜法測試待測樣品中的硒代胱氨酸、甲基硒代半胱氨酸、硒脲、硒代蛋氨酸、硒代乙硫氨酸、亞硒酸根和硒酸根7種硒形態和含量。本發明的測定方法無機硒提取加入碘乙酰胺，解決了HPLC?HG?AFS中分析測試亞硒酸根回收率差的問題；前處理操作快速、簡便，蛋白酶所需種類少且用量少，試劑成本低，樣品提取率高，大大提高了硒形態HPLC?HG?AFS分析方法的靈敏度和分離度；一次可同時分析測定7種硒形態含量，且儀器分析測試時間短。

技術領域

本發明屬于質量檢測技術領域，具體涉及一種測定蔬菜中硒形態含量的方法。

背景技術

硒作為一種人體必需的營養元素，人體內各種活性酶的重要組成成分，被世界衛生組織和中華醫學會定為二十一世紀繼碘、鋅后必補的第三大微量營養保健元素。硒在預防克山病、增強免疫力、抗氧化、防癌抗癌、護肝、保心、促進腦力發育、防治糖尿病、調節內分泌與維生素吸收與利用、保護甲狀腺和前列腺等方面均發揮著重要作用。

硒在生物體內的生物利用度、有效性、毒性以及代謝等不僅與硒的總量有關，更與硒賦存形態密切相關。農產品中硒的常見形態主要分為無機硒和有機硒。無機硒，如硒酸鹽、亞硒酸鹽，毒性較大，在人體中吸收和利用率低，長期攝入易導致人體病變。有機硒，如硒代蛋氨酸、硒代胱氨酸、甲基硒代半胱氨酸等，經生物轉換而得，生物活性強，易被人體所吸收和利用，安全無副作用和營養價值高。可以說，硒的賦存形態真正決定了硒在生物體內的可利用價值和營養價值。硒在不同食物中的結合形式和形態種類均不同，有的以蛋白結合態為主，有的與多糖類結合為主，這樣就導致不同樣品的硒提取釋放方法不一。此外，不同種類的樣品需要的酶種類不同，不同酶的提取量、提取溫度等條件亦不同，因此很難形成針對所有樣品統一的硒形態前處理方法。

食品中硒形態分析方法有高效液相色譜-電感耦合等離子體質譜(HPLC-ICP-MS)法、高效液相色譜-串聯三重四級桿質譜(HPLC-MS-MS)法、體積排阻色譜(SEC-HPLC)法、氣相色譜-電感耦合等離子體質譜(GC-ICP-MS)法、毛細管電泳-電感耦合等離子體質譜(CE-HPLC-ICP-MS)法、高效液相色譜-原子熒光光譜(HPLC-HG-AFS)法等。液相色譜硒形態分離多為離子交換(AE)法和離子對(IP)法，離子對試劑多為三氟乙酸、七氟丁酸和己烷磺酸等，罕見以四丁基溴化銨為離子對試劑分離硒形態的報道。目前，關于食品中硒形態HPLC-AFS分析方法的報道不多，樣品類型主要集中于富硒酵母、大米、食用菌和水產品等，且主要方法HPLC-ICP-MS法，但是HPLC-ICP-MS法測硒時存在質譜干擾嚴重，需要較為豐富的分析測試經驗，且其運行成本和購置成本顯著較高。

發明內容

因此，本發明要解決的技術問題在于現有技術中對蔬菜中硒的形態和含量檢測靈敏度差，分析時間過長的缺陷，從而提供了一種測定蔬菜中硒形態含量的方法，具體為離子對反相高效液相色譜-紫外-氫化物發生-原子熒光光譜法(IP-RP-HPLC-UV-HG-AFS)。

為此，本發明采用如下技術方案：

本發明提供一種測定蔬菜中硒形態含量的方法，所述方法使用離子對反相高效液相色譜-紫外-氫化物發生-原子熒光光譜法測試待測樣品中的硒代胱氨酸(SeCys₂)、甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)、硒脲(SeUr)、硒代蛋氨酸(SeMet)、硒代乙硫氨酸(SeEt)、亞硒酸根(Se(IV))和硒酸根(Se(VI))7種硒形態和含量，根據硒形態保留時間確定形態，峰面積確定含量。

進一步地，包括如下步驟：

S1：取1份待測樣品加入碘乙酰胺溶液，使用超聲波提取后過濾上機測試，測定亞硒酸根的形態和含量；

S2：取另外1份待測樣品，加入水后超聲破壁，再加入蛋白酶使用超聲波提取后過濾上機測試，測定除亞硒酸根以外硒的形態和含量。