[發(fā)明專利]一種基于混合抗體的膠體金法快速診斷新型冠狀病毒抗原的檢測試劑盒

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202110463016.6
• 申請日: 2021-04-28
• 公開（公告）號(hào): CN112986568A
• 公開（公告）日: 2021-06-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉中民;孫毅;朱文敏;陳雪峰
• 申請（專利權(quán)）人: 上海市東方醫(yī)院（同濟(jì)大學(xué)附屬東方醫(yī)院）
• 主分類號(hào): G01N33/58
• 分類號(hào): G01N33/58;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/577
• 代理公司: 上海驍象知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31315
• 代理人: 林煒

一種基于混合抗體的膠體金法快速診斷新型冠狀病毒抗原的檢測試劑盒，包括底板、樣品墊、結(jié)合墊、包被膜和吸收墊；結(jié)合墊上負(fù)載有膠體金標(biāo)記的混合捕獲抗體，混合捕獲抗體包含有抗新型冠狀病毒N蛋白單克隆抗體I和抗新型冠狀病毒S蛋白單克隆抗體I；包被膜設(shè)有檢測區(qū)和質(zhì)控區(qū)，每平方厘米檢測區(qū)負(fù)載有混合檢測抗體，混合檢測抗體包含有抗新型冠狀病毒N蛋白特異性單克隆抗體II和抗新型冠狀病毒S蛋白特異性單克隆抗體II，質(zhì)控區(qū)負(fù)載有混合重組蛋白，混合重組蛋白包含有重組IgG Fc蛋白I和重組IgG Fc蛋白II。本發(fā)明的檢測結(jié)果快速準(zhǔn)確，特異性強(qiáng)，靈敏度高，可以顯著提高新型冠狀肺炎的檢出率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)檢測領(lǐng)域，涉及一種試劑盒，具體來說是一種基于混合抗體的采用膠體金法快速診斷新型冠狀病毒抗原的檢測試劑盒。

背景技術(shù)

2019新型冠狀病毒(COVID-19)，因2019年發(fā)生病毒性肺炎病例而被發(fā)現(xiàn)，2020年1月12日被世界衛(wèi)生組織命名。和中東呼吸綜合征病毒(MERS)以及嚴(yán)重急性呼吸綜合征病毒(SARS)都屬于β冠狀病毒，屬于人畜共患病原體，可引起動(dòng)物與人之間的感染，也可引起人與人之間的感染。COVID-19含有棘突(S)蛋白、膜(M)蛋白、和核衣殼(N)蛋白等標(biāo)志性蛋白。為了防止病毒的擴(kuò)散和獲得有效的治療，針對病毒快速準(zhǔn)確的診斷就顯得尤為重要。

目前針對新型冠狀病毒的檢測方法主要有核酸檢測、抗體檢測和抗原檢測。核酸檢測，具有早期診斷、靈敏度和特異性高等特點(diǎn)，是確診新冠肺炎的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但對樣本的處理和運(yùn)輸需要實(shí)施一整套非常嚴(yán)格的流程，對檢測設(shè)備、場地及操作人員都有極高的要求，且檢測用時(shí)長，因此具有一定的局限性；抗體檢測，雖然具有方便快捷、檢測用時(shí)短，可以彌補(bǔ)核酸檢測出現(xiàn)假陰性而造成漏診的缺點(diǎn)。但又常常由于個(gè)別患者血液中含有類風(fēng)濕因子、自身抗體或腫瘤細(xì)胞等因素而易出現(xiàn)假陽性，以及由于人在感染新冠病毒后需要兩周左右才能產(chǎn)生抗體，故此檢測方法存在一定的漏檢窗口期；抗原檢測，具有診斷快速、準(zhǔn)確、對設(shè)備和人員要求低，因此可應(yīng)用于社區(qū)、基層醫(yī)院、機(jī)場、海關(guān)甚至家庭等基層的早期初步篩查。但由于新型冠狀病毒主要侵犯肺泡等下呼吸道，所以往往從鼻咽、口咽等上呼吸道的取樣中所含病毒數(shù)量較少，而目前市場上存在的抗原檢測試劑盒通常采用單一抗原特異性抗體作為檢測試劑，因此容易出現(xiàn)對樣本中的抗原（病毒蛋白）敏感性不夠而造成漏檢，從而出現(xiàn)假陰性。

因此，亟需一種更加方便快捷、準(zhǔn)確有效的診斷新型冠狀病毒抗原檢測試劑盒用于早期的篩查診斷。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)中出現(xiàn)的種種問題，本發(fā)明提供了一種基于混合抗體的膠體金法快速診斷新型冠狀病毒抗原的檢測試劑盒，從而成功地解決了現(xiàn)有技術(shù)檢測新型冠狀病毒時(shí)間長、準(zhǔn)確度不高的技術(shù)問題。

本發(fā)明提供的這種準(zhǔn)確靈敏基于混合抗體快速診斷新型冠狀病毒抗原的檢測試劑盒，包括底板、樣品墊、結(jié)合墊、包被膜和吸收墊，沿待測液體樣本流動(dòng)方向，樣品墊、結(jié)合墊、包被膜和吸收墊依次固定于底板上，所述的樣品墊的一端和所述的結(jié)合墊的一端緊密連接，所述的結(jié)合墊的另外一端和所述的包被膜的一端緊密連接，所述的包被膜的另外一端和所述的吸收墊的一端緊密連接；

所述的結(jié)合墊上負(fù)載有1.2-1.8μg/cm²膠體金標(biāo)記的混合捕獲抗體，所述的混合捕獲抗體包含有抗新型冠狀病毒N蛋白抗體I和抗新型冠狀病毒S蛋白抗體I，將抗新型冠狀病毒N蛋白抗體I用包被緩沖液(10mM pH7.2的PBS)稀釋至濃度為15-20μg/ml與膠體金溶液（pH7.4）混勻反應(yīng)得到第一標(biāo)記抗體；同樣將抗新型冠狀病毒S蛋白抗體I用包被緩沖液(10mM pH7.2的PBS)稀釋至濃度為15-20μg/ml與膠體金溶液（pH7.4）混勻反應(yīng)得到第二標(biāo)記抗體；將第一標(biāo)記抗體與第二標(biāo)記抗體按80% : 20%的體積比混和得到所述的混合捕獲抗體；