[發明專利]一種利用魔芋花粉離體培養獲得單倍體植株的方法有效
| 申請號： | 202110459770.2 | 申請日： | 2021-04-27 |
| 公開（公告）號： | CN113100063B | 公開（公告）日： | 2022-03-22 |
| 發明（設計）人： | 段龍飛;覃劍鋒;蔡陽光;郭邦利;陳國愛 | 申請（專利權）人： | 安康市農業科學研究院 |
| 主分類號： | A01H4/00 | 分類號： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 西安研創天下知識產權代理事務所(普通合伙) 61239 | 代理人： | 梁寶龍 |
| 地址： | 725021*** | 國省代碼： | 陜西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 利用 魔芋 花粉 培養 獲得 單倍體 植株 方法 | ||
1.一種利用魔芋花粉離體培養獲得單倍體植株的方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1、魔芋雄花獲得及消毒處理：
S11、選擇4齡優質開花的花魔芋，在花藥未散粉前取下雄花段，將雄花段在2~6℃下預處理1~2天，得到預處理雄花段；
S12、將步驟S11得到的預處理雄花段進行消毒處理，消毒完成后，干燥，得到消毒雄花段；
S2、催粉和花粉愈傷組織誘導：
將步驟S12得到的消毒雄花段，在無菌條件下切割成小段，將小段接種到愈傷組織誘導培養基中誘導培養3~5天，使雄花散粉，然后利用暗培養-光培養手段培養2個周期，得到愈傷組織；
所述暗培養-光培養手段1個周期的具體實施步驟為：先在25~27℃下暗培養10~15天，接著在25~27℃下光培養10~15天；
所述光培養時采用普通光進行照射，光照強度為1500~2000Lx，光照時間為10~12h/d；
所述愈傷組織誘導培養基為MS基本培養基+NAA 1.0mg/L+KT 0.5mg/L+6-BA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂4.5g/L；
S3、分化培養：
在無菌條件下，將步驟S2得到的愈傷組織轉入分化培養基中，采用白光-紅藍光手段培養5個周期，使得愈傷組織分化產生不定芽，不定芽分化、生長，即得到魔芋組培苗；
所述分化培養基為MS基本培養基+KT 0.5mg/L+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1 mg/L+IAA0.5mg/L+蔗糖40g/L+瓊脂6g/L；
上述步驟S2中誘導培養、暗培養-光培養環節以及步驟S3分化培養環節均在密閉培養容器中進行；
所述白光-紅藍光手段1個周期的具體實施步驟為：先在25~27℃，普通光照下培養5天，接著于25~27℃，紅藍光照下培養2天；
所述普通光照培養時的光照強度為3500~4500Lx，光照時間為14~16h/d；所述紅藍光照培養時的紅藍光比例為2:1，光照強度為1000~1500Lx，光照時間為12~16h/d。
2.根據權利要求1所述的利用魔芋花粉離體培養獲得單倍體植株的方法，其特征在于，步驟S2中，所述愈傷組織誘導培養基的pH值為5.8；步驟S3中，所述分化培養基的pH值為5.8。
3.根據權利要求1所述的利用魔芋花粉離體培養獲得單倍體植株的方法，其特征在于，步驟S2中，所述誘導培養時采用普通光進行照射，光照強度為4000~5000Lx，光照時間為14~16h/d，溫度為27~29℃。
4.根據權利要求1所述的利用魔芋花粉離體培養獲得單倍體植株的方法，其特征在于，步驟S12中，所述消毒處理過程的具體方法為：先將步驟S11得到的預處理雄花段水洗10~20min，接著用75%酒精浸泡30~50s，然后用次氯酸鈉浸泡8~10min，最后用無菌水沖洗3~5次。
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