[發(fā)明專(zhuān)利]一種枯草桿菌黑色變種芽孢懸液的制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110458989.0
• 申請(qǐng)日: 2021-04-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113151137A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 呂海鵬;宗珊盈;董安輝;王亞飛;劉玉蓮;徐敏
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中檢集團(tuán)中原農(nóng)食產(chǎn)品檢測(cè)（河南）有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/36
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/36;C12N1/20;C12R1/125
• 代理公司: 鄭州圖釘專(zhuān)利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 41164
• 代理人: 郭一路

1.一種枯草桿菌黑色變種芽孢懸液的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：

A：芽孢菌種的活化處理，首先將菌種融化分散，然后取少量菌種懸液滴入至營(yíng)養(yǎng)肉湯內(nèi)，進(jìn)行培養(yǎng)后直至得到第三代芽孢菌種懸液；

B：芽孢菌種的繁殖，無(wú)菌吸取適量第三代芽孢菌種懸液，接種至營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，置于培養(yǎng)箱內(nèi)繁殖數(shù)天；

C：芽孢的誘導(dǎo)生長(zhǎng)，采用低溫誘導(dǎo)的方式作用于繁殖后的芽孢菌種，促進(jìn)芽孢生長(zhǎng)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種枯草桿菌黑色變種芽孢懸液的制備方法，其特征在于：所述步驟一中，進(jìn)行培養(yǎng)得到第三代培養(yǎng)物的具體過(guò)程為，

a：取含有芽孢菌種的凍干管，在無(wú)菌操作下打開(kāi)，使用毛細(xì)吸管吸取適量營(yíng)養(yǎng)肉湯至凍干管中，輕柔吹吸數(shù)次，使芽孢菌種融化分散；

b：在凍干管中取10.0μl芽孢菌種懸液滴入至含有5.0～10.0ml營(yíng)養(yǎng)肉湯的培養(yǎng)基試管中，培養(yǎng)后得到第一代芽孢菌種懸液；

c：取第一代芽孢菌種懸液，劃線(xiàn)接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后得到第二代芽孢菌種懸液；

d：挑取第二代芽孢菌種懸液中的典型菌落，接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后得到第三代芽孢菌種懸液。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種枯草桿菌黑色變種芽孢懸液的制備方法，其特征在于：所述第一、二、三代芽孢菌種懸液的培養(yǎng)條件均是將相對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)基置于37℃培養(yǎng)18～24h。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種枯草桿菌黑色變種芽孢懸液的制備方法，其特征在于：取第一代芽孢菌種懸液時(shí)，采用接種環(huán)進(jìn)行沾取。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種枯草桿菌黑色變種芽孢懸液的制備方法，其特征在于：所述典型菌落為實(shí)際操作中面積較大、菌種較多的菌落。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種枯草桿菌黑色變種芽孢懸液的制備方法，其特征在于：所述步驟二中，芽孢菌種懸液的繁殖具體過(guò)程為，吸取第三代芽孢菌種懸液5ml，接種于含有營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的羅氏瓶中并滴入至營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的表面，搖動(dòng)羅氏瓶使該芽孢懸液布滿(mǎn)至培養(yǎng)基表面，然后將多余的菌液吸出，培養(yǎng)后得到大量繁殖的芽孢菌種懸液。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種枯草桿菌黑色變種芽孢懸液的制備方法，其特征在于：在吸取第三代芽孢菌種懸液時(shí)，在無(wú)菌環(huán)境中進(jìn)行。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種枯草桿菌黑色變種芽孢懸液的制備方法，其特征在于：所述羅氏瓶?jī)?nèi)的芽孢懸液的培養(yǎng)條件是，將羅氏瓶置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3天。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種枯草桿菌黑色變種芽孢懸液的制備方法，其特征在于：所述步驟三中，低溫誘導(dǎo)的方式為，從培養(yǎng)箱內(nèi)取出繁殖數(shù)天的芽孢菌種，置于4℃冰箱中，培養(yǎng)2～3天。