[發(fā)明專利]一種枯草桿菌黑色變種芽孢懸液的制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110458989.0
• 申請(qǐng)日: 2021-04-27
• 公開（公告）號(hào): CN113151137A
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 呂海鵬;宗珊盈;董安輝;王亞飛;劉玉蓮;徐敏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中檢集團(tuán)中原農(nóng)食產(chǎn)品檢測(cè)（河南）有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/36
• 分類號(hào): C12N1/36;C12N1/20;C12R1/125
• 代理公司: 鄭州圖釘專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 41164
• 代理人: 郭一路

本發(fā)明涉及一種枯草桿菌黑色變種芽孢懸液的制備方法，包括如下步驟：芽孢菌種的活化處理，首先將菌種融化分散，然后取少量菌種懸液滴入至營養(yǎng)肉湯內(nèi)，進(jìn)行培養(yǎng)后直至得到第三代芽孢菌種懸液，芽孢菌種的繁殖，無菌吸取適量第三代芽孢菌種懸液，接種至營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，置于培養(yǎng)箱內(nèi)繁殖數(shù)天，芽孢的誘導(dǎo)生長，采用低溫誘導(dǎo)的方式作用于繁殖后的芽孢菌種，促進(jìn)芽孢生長。本發(fā)明的整個(gè)過程操作簡單，由原來的12天縮短至8天左右，明顯提高了芽孢的制備效率，且經(jīng)檢測(cè)芽孢形成率達(dá)到了98%以上，得到了有效提升。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于芽孢菌體制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種枯草桿菌黑色變種芽孢懸液的制備方法。

背景技術(shù)

枯草桿菌黑色變種芽孢，是枯草芽孢桿菌的一個(gè)亞種，非致病菌，單個(gè)或呈短鏈狀排列，芽孢橢圓形，中生，不膨大?？莶輻U菌黑色變種芽孢因能產(chǎn)生對(duì)熱、紫外線、電離輻射和某些化學(xué)物質(zhì)很強(qiáng)抗性的芽孢，可以作為消毒劑檢測(cè)及滅菌質(zhì)量控制方面的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行應(yīng)用，我國的《消毒技術(shù)規(guī)范》中將枯草桿菌黑色變種芽孢作為消毒滅菌指示微生物，并在《消毒技術(shù)規(guī)范》中記載有枯草桿菌黑色變種芽孢懸液的制備時(shí)間為12天左右，在此過程中，待芽孢形成率達(dá)到95%以上才能進(jìn)一步制備芽孢懸液，若未達(dá)到此數(shù)值，還應(yīng)在室溫內(nèi)放置一段時(shí)間直至達(dá)到95%的芽孢形成率，因此該實(shí)驗(yàn)的芽孢形成率很難保證，且操作較為復(fù)雜，制備效率低且芽孢形成率不高，針對(duì)上述問題，本發(fā)明提供一種操作簡單，能夠提高制備效率和芽孢形成率的枯草桿菌黑色變種芽孢懸液的制備方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，而提供一種操作簡單，能夠提高制備效率和芽孢形成率的枯草桿菌黑色變種芽孢懸液的制備方法。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：一種枯草桿菌黑色變種芽孢懸液的制備方法，包括如下步驟：

A：芽孢菌種的活化處理，首先將菌種融化分散，然后取少量菌種懸液滴入至營養(yǎng)肉湯內(nèi)，進(jìn)行培養(yǎng)后直至得到第三代芽孢菌種懸液；

B：芽孢菌種的繁殖，無菌吸取適量第三代芽孢菌種懸液，接種至營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，置于培養(yǎng)箱內(nèi)繁殖數(shù)天；

C：芽孢的誘導(dǎo)生長，采用低溫誘導(dǎo)的方式作用于繁殖后的芽孢菌種，促進(jìn)芽孢生長。

優(yōu)選的，所述步驟一中，進(jìn)行培養(yǎng)得到第三代培養(yǎng)物的具體過程為，

a：取含有芽孢菌種的凍干管，在無菌操作下打開，使用毛細(xì)吸管吸取適量營養(yǎng)肉湯至凍干管中，輕柔吹吸數(shù)次，使芽孢菌種融化分散；

b：在凍干管中取10.0μl芽孢菌種懸液滴入至含有5.0～10.0ml營養(yǎng)肉湯的培養(yǎng)基試管中，培養(yǎng)后得到第一代芽孢菌種懸液；

c：取第一代芽孢菌種懸液，劃線接種于營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后得到第二代芽孢菌種懸液；

d：挑取第二代芽孢菌種懸液中的典型菌落，接種于營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后得到第三代芽孢菌種懸液。

優(yōu)選的，所述第一、二、三代芽孢菌種懸液的培養(yǎng)條件均是將相對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)基置于37℃培養(yǎng)18～24h。

優(yōu)選的，取第一代芽孢菌種懸液時(shí)，采用接種環(huán)進(jìn)行沾取。

優(yōu)選的，所述典型菌落為實(shí)際操作中面積較大、菌種較多的菌落。

優(yōu)選的，所述步驟二中，芽孢菌種懸液的繁殖具體過程為，吸取第三代芽孢菌種懸液5ml，接種于含有營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的羅氏瓶中并滴入至營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的表面，搖動(dòng)羅氏瓶使該芽孢懸液布滿至培養(yǎng)基表面，然后將多余的菌液吸出，培養(yǎng)后得到大量繁殖的芽孢菌種懸液。

優(yōu)選的，在吸取第三代芽孢菌種懸液時(shí)，在無菌環(huán)境中進(jìn)行。

優(yōu)選的，所述羅氏瓶內(nèi)的芽孢懸液的培養(yǎng)條件是，將羅氏瓶置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3天。

優(yōu)選的，所述步驟三中，低溫誘導(dǎo)的方式為，從培養(yǎng)箱內(nèi)取出繁殖數(shù)天的芽孢菌種，置于4℃冰箱中，培養(yǎng)2～3天。