[發明專利]一種聚合物微球及其制備與應用

有效

• 申請號: 202110457533.2
• 申請日: 2021-04-27
• 公開（公告）號: CN113355313B
• 公開（公告）日: 2022-05-24
• 發明（設計）人: 易喻;岑靈照;應國清;梅建鳳;陳建澍;張彥璐;王旭東
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N11/084
• 分類號: C12N11/084;C12N11/10;C07K16/00;C07K1/22;B01J20/26;B01J20/28;B01J20/30;B01D15/38;C12R1/19
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;李世玉

1.一種用于純化IgG抗體的聚合物微球的制備方法，其特征在于所述聚合物微球是以聚乙烯醇和海藻酸鈉為原料，加入水在80-100℃溶解后，降溫至40℃后加入含ZZ融合蛋白基因的重組大腸桿菌菌液制成水相；再將液體石蠟和表面活性劑混合為油相，水相緩慢滴加到油相中，30-70℃攪拌形成乳液后，再加入飽和硼酸氯化鈣水溶液，攪拌制備得到所述的聚合物微球；所述表面活性劑為span80；所述ZZ融合蛋白是將ZZ蛋白通過連接肽與錨定蛋白LppOmpA融合而成；

所述ZZ蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，連接肽氨基酸序列為GIPG；所述錨定蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO.3；

ZZ融合蛋白編碼基因的核苷酸序列為SEQ ID NO.4所示；

所述含ZZ融合蛋白基因的重組大腸桿菌是將ZZ蛋白通過連接肽與錨定蛋白LppOmpA融合后的基因，用NcoI和HindIII限制性內切酶，轉入載體pET28a，構建pET28a- LppOmpA-ZZ質粒，轉化E.coli BL21(DE3)制備得到；

所述含ZZ融合蛋白基因的重組大腸桿菌菌液按如下方法制備：將含ZZ融合蛋白基因的重組大腸桿菌均勻涂布在含有50 μg/mL 卡那霉素的LB平板上，在30 ℃下放置培養過夜；從LB平板上挑取單菌落，以體積濃度1%的接種量接種于含50 μg/mL卡那霉素的LB液體培養基中，37 ℃，180 rpm搖床培養過夜至OD₆₀₀為0.62，獲得所述的菌液；

所述海藻酸鈉與聚乙烯醇質量比為1：6，所述水體積用量以海藻酸鈉質量計為90-100mL/g；所述重組大腸桿菌菌液以濕菌體重量計，則濕菌體加入量與海藻酸鈉質量比為1-5:100；所述液體石蠟與表面活性劑體積比為10-30:1.5；所述油相與水相體積比為10-30:20，所述油相與飽和硼酸氯化鈣水溶液體積比為20-60:21.5。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于飽和硼酸氯化鈣水溶液滴加速度40mL/5s。

3.一種根據權利要求1所述方法制備的用于純化IgG抗體的聚合物微球。

4.一種權利要求3所述聚合物微球在制備抗體純化填料中的應用。

5.如權利要求4所述的應用，其特征在于所述抗體包括IgG抗體。