[發明專利]一種血清二氧化碳測定試劑球的制備方法及試劑球

在審

• 申請號: 202110454996.3
• 申請日: 2021-04-26
• 公開（公告）號: CN113278680A
• 公開（公告）日: 2021-08-20
• 發明（設計）人: 牟健;汪晨宇;周慧欣;陳明
• 申請（專利權）人: 深圳市錦瑞生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/527
• 分類號: C12Q1/527;C12Q1/32
• 代理公司: 深圳市六加知識產權代理有限公司 44372
• 代理人: 孟麗平

本發明實施例涉及醫學免疫體外診斷技術領域，尤其涉及一種血清二氧化碳測定試劑球的制備方法及試劑球，該方法將混合液以液滴的形式滴在液氮中，使液滴形成冰球，再將冰球進行冷凍干燥制得血清二氧化碳測定試劑球，其中，混合液包括以下組分：緩沖液5?150mmol/L，磷酸烯醇式丙酮酸5?20g/L，還原型輔酶Ⅰ：0.1?10g/L，蘋果酸脫氫酶5?20KU/L，磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶0.1?5KU/L，穩定劑0.1?10g/L，賦形劑10?100g/L。該劑量范圍的賦形劑能夠保證試劑球的形態及復融溶解性，保護反應物活性，并有益于試劑球完全凍干。也即，通過該方法制備出的血清二氧化碳測定試劑球，具有較好的形態及復融溶解性，能完全凍干，從而，具有較高的穩定性和精密度，并能實現及時診斷。

技術領域

本發明實施例涉及醫學免疫體外診斷技術領域，尤其涉及一種血清二氧化碳測定試劑球的制備方法及試劑球。

背景技術

血清或血漿中90％～95％的CO₂以HCO₃^-的形式存在，是機體維持酸堿平衡的主要緩沖堿，也是判斷酸堿代謝情況的常用指標之一。血液中CO₂含量測定對酸堿平衡紊亂性疾病的進程和療效判斷提供了重要的依據，在臨床上應用十分普遍，是不可缺少的急診項目之一。

目前，臨床上用于測定血清二氧化碳的酶法，一方面，試劑液需要額外添加還原性輔酶I(NADH)的循環再生系統，并且，穩定性較差。另一方面，其干粉試劑復溶后穩定性較差，液體試劑有效期較短，且依賴大型全自動生化分析儀，難以應用在病人身邊即時診斷(point-of-care，POCT)，使用上受到一定限制。雖然，現有用于檢測其它項目的凍干試劑球，但是，現有的凍干試劑球形態較差，難以完全凍干，導致其具有較低的穩定性和準確性。

發明內容

本發明實施例主要解決的技術問題是提供一種血清二氧化碳測定試劑球的制備方法、試劑球及微流控芯片，采用該方法制備得到的試劑球，能使試劑球保持活性，穩定性好，并具有較好的形態及復融溶解性，具有較高精密度。

為解決上述技術問題，第一方面，本發明實施例中提供給了一種血清二氧化碳測定試劑球的制備方法，包括：

將緩沖液、磷酸烯醇式丙酮酸、還原型輔酶Ⅰ、蘋果酸脫氫酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、鎂鹽、穩定劑、賦形劑和水混合形成混合液，并調整所述混合液的PH值至預設值；

將所述混合液的液滴滴在液氮中，以使所述液滴形成冰球；

將所述冰球進行冷凍干燥制得所述血清二氧化碳測定試劑球；

其中，所述混合液包括以下組分：緩沖液5-150mmol/L，磷酸烯醇式丙酮酸5-20g/L，還原型輔酶Ⅰ：0.1-10g/L，蘋果酸脫氫酶5-20KU/L，磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶0.1-5KU/L，穩定劑0.1-10g/L，賦形劑10-100g/L。

在一些實施例中，所述將緩沖液、磷酸烯醇式丙酮酸、還原型輔酶Ⅰ、蘋果酸脫氫酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、鎂鹽、穩定劑、賦形劑和水混合形成混合液，并調整所述混合液的PH值至預設值，包括：

將所述緩沖液加入第一預設定量的水中；

待所述緩沖液在所述水中完全溶解后，依次加入穩定劑、賦形劑和鎂鹽，得到第一溶液，并調節所述第一溶液的PH值至所述預設值，其中，所述預設值的范圍為7.5-9.0；

將所述磷酸烯醇式丙酮酸、所述還原型輔酶Ⅰ、所述蘋果酸脫氫酶和所述磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶依次加入所述第一溶液中，并將第二預設定量的水加入所述第一溶液中，得到第三預設定量的所述混合液。

在一些實施例中，所述賦形劑包括海藻糖、甘露醇、肌醇、水溶性淀粉、葡聚糖1萬、葡聚糖4萬中的至少一種。