[發明專利]一種基于LFD-RMA法檢測人腺病毒的引物探針組

在審

• 申請號: 202110452444.9
• 申請日: 2021-04-26
• 公開（公告）號: CN113073149A
• 公開（公告）日: 2021-07-06
• 發明（設計）人: 張玉坤;陳大為;陳龍;張瑤
• 申請（專利權）人: 濟南國益生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 濟南信在專利代理事務所(特殊普通合伙) 37271
• 代理人: 黃波

本申請屬于生物檢測技術領域，具體為一種基于LFD?RMA法檢測人腺病毒的引物探針組，包括檢測人腺病毒的引物對及對應的探針，所述下游引物的5’端用Biotin標記；探針的5’端用FAM標記，第31個堿基替換為THF(dSpacer)，3’末端被阻斷基團C3?spacer修飾；擴增產物大小不超過500bp。本發明所述試劑盒具有操作簡單、靈敏度高、特異性強、與其他病原體無交叉反應、檢測速度快等特點，為人腺病毒感染的早期診斷提供了可靠的實驗依據。

技術領域

本申請屬于生物檢測技術領域，具體為一種基于LFD-RMA法檢測人腺病毒的引物探針組。

背景技術

人腺病毒(adenovirus，ADV)是一種無外殼的雙鏈DNA病毒，腺病毒感染可導致多種臨床表現和疾病，包括呼吸道疾病(如普通感冒、支氣管炎、肺炎等)、消化道疾病(如腹瀉、胃腸炎等)、眼結膜炎、膀胱炎和神經系統疾病等。各年齡段人群均可感染人腺病毒，免疫系統較弱或慢性呼吸系統疾病、心臟病等患者感染后引發嚴重疾病的風險較高。且ADV也是目前造成嬰幼兒肺炎死亡和致殘的重要原因之一。人腺病毒傳染性較強，常可引起暴發流行，因此快速、準確的檢測技術對預防和控制腺病毒的傳播有重要意義。

目前ADV的檢測有病毒分離、血清學檢測、分子生物學等方法。病毒分離和血清學檢測操作繁瑣、耗時長，且在病毒載量較低時，易造成漏檢；分子生物學方法主要為熒光定量PCR法，需要相關的昂貴儀器設備且需要有專業技術人員操作，因此在基層和現場的檢測應用受到很大限制。而重組酶介導擴增(Recombinase MediatedAmplification,RMA)技術，是近年來發展出的一種敏感、特異、簡便、快捷的等溫核酸擴增技術，被認為是可替代PCR的核酸檢測技術，主要依賴重組酶、單鏈DNA結合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶三種酶。RMA反應可以在37-42℃進行，整個過程在30min內即可達到檢測水平，可實現ADV的快速檢測。

本發明采用LFD-RMA法建立快速檢測人腺病毒的方法，為人腺病毒的現場檢測提供一種快速、簡單、可靠的新方法。

發明內容

為了解決現有技術的問題，本申請提供了一種基于LFD-RMA法檢測人腺病毒的引物探針組，本申請是通過下述方案實現的：

一種基于LFD-RMA法檢測人腺病毒的引物探針組，包括檢測人腺病毒的引物對及對應的探針，其中，引物和探針序列為：

ADV-F：

5’-TAAGGCTAATGGCAATGGCGCAGGTGATAATGG-3’；

ADV-R：

5’-[Biotin]GGTTGTCAGATATTTCCACGTTGGTGGGGTTGT-3’；

ADV-P：

5’-[FAM]AGAAATTTCCTTTACTCCAATATTGCACTA[dSpacer]ACCTGCCAGACAAGCT[C3-spacer]-3’。

優選的，所述下游引物的5’端用Biotin標記；探針的5’端用FAM標記，第31個堿基替換為THF(dSpacer)，3’末端被阻斷基團C3-spacer修飾；擴增產物大小不超過500bp。

一種基于LFD-RMA法檢測人腺病毒的試劑盒，該試劑盒中包括有：含有擴增反應試劑的檢測管、緩沖液、醋酸鎂、標準陽性質粒、無菌雙蒸水、側流層析檢測試紙條。

優選的，所述擴增反應試劑單管分裝，為干粉形態，包括RMA引物對及檢測探針組、重組酶、UvsY蛋白、單鏈結合蛋白、DNA聚合酶、核酸內切酶IV。