[發明專利]一種抑制hsa_circ_0001610表達的shRNA及其表達載體

有效

• 申請號: 202110450703.4
• 申請日: 2021-04-25
• 公開（公告）號: CN113151275B
• 公開（公告）日: 2022-07-05
• 發明（設計）人: 李夢倩
• 申請（專利權）人: 四川大學華西醫院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/11;C12N15/63;C12N1/21
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李安霞

本發明公開了一種抑制hsa_circ_0001610表達的shRNA及其表達載體，屬于分子生物學領域。本發明的shRNA具有如SEQ ID NO.4所示的靶點序列。本發明的表達載體包含序列如SEQ ID NO.2～3所示DNA，可靶向hsa_circ_0001610，高效地抑制其表達。

技術領域

本發明屬于分子生物學領域。

背景技術

環狀RNA(circular RNA，circRNA)是一類具有閉合環狀結構的RNA，主要由mRNA前體經過“反向剪接”環化形成。由于circRNA不具有mRNA的5`端帽結構和3`端多聚腺苷酸結構，耐受核糖核酸外切酶的降解、穩定性較好，故具有作為腫瘤標志物的巨大潛力。研究表明，circRNA參與腫瘤的發生發展、腫瘤干性、藥物抵抗等，是腫瘤治療的新方法和新靶點。

研究報道，circRNA主要通過以下機制參與發揮生物學功能：1)作為miRNA的分子海綿，影響miRNA調節的靶基因表達；2)與蛋白相互作用，實現對蛋白功能的調控；3)編碼具有功能的多肽。circRNA在腫瘤細胞周期、細胞凋亡、血管形成、侵襲等方面發揮作用。circRNAs的異常表達可能是腫瘤啟動的早期關鍵性事件。其可作為腫瘤的分子標志物或潛在治療靶點，為腫瘤的早期診斷、療效評價、預后預測和腫瘤基因治療提供新靶點。

短發夾RNA(shRNA)是一種常用的敲低(降低靶基因表達)工具，通過載體將其表達序列轉入細胞內，并可進一步整合至基因組中，實現shRNA的穩定表達，并可加工成siRNA，從而持續抑制基因表達；其也可通過與目標mRNA互補結合序列特異性地實現靶mRNA降解。但是針對circRNA設計shRNA的難度較大，其靶點序列必須跨越環化位點，可供選擇的靶點序列十分有限，往往得到的shRNA敲低效率(敲低效率＝敲低前后靶基因的表達量之差/敲低前靶基因表達量，下同)不夠。Guarnerio等設計了一種敲低CircPOK的shRNA，其敲低效率約為60％(Guarnerio J，et al..Intragenic antagonistic roles of protein andcircRNA in tumorigenesis.Cell Res.2019 Aug；29(8)：628-640.)；Chen等設計了一種敲低circRNA_0000285的shRNA，其敲低效率在50％～60％之間(Chen RX，et al.CircularRNA circRNA_0000285 promotes cervical cancer development by regulatingFUS.Eur Rev Med Pharmacol Sci.2019 Oct；23(20)：8771-8778.)。

hsa_circ_0001610是一種由TNFRSF21基因表達的circRNA，其被發現在子宮內膜癌組織中高表達，是子宮內膜癌潛在的治療靶點。目前尚未見有關使用shRNA敲低hsa_circ_0001610的報道。

發明內容

本發明要解決的問題是：提供一種抑制環狀RNA hsa_circ_0001610表達的shRNA及其表達載體。

本發明的技術方案如下：

一種抑制hsa_circ_0001610表達的shRNA，其靶點序列如SEQ ID NO.4所示。

本發明中“靶點序列”指靶基因與shRNA的基因所共有的序列；因為存在該“靶點序列”，shRNA或其加工得到的siRNA產物得以特異性識別靶基因的mRNA。

進一步地，表達該shRNA的DNA的正義鏈序列如SEQ ID NO.2所示。

一種雙鏈寡核苷酸，其正義鏈序列如SEQ ID NO.2所示，反義鏈序列如SEQ IDNO.3所示。

一種抑制hsa_circ_0001610表達的shRNA的表達載體，所述載體包括表達前述的shRNA的DNA序列。