[發明專利]一種抑制hsa_circ_0001610表達的shRNA及其表達載體有效
| 申請號： | 202110450703.4 | 申請日： | 2021-04-25 |
| 公開（公告）號： | CN113151275B | 公開（公告）日： | 2022-07-05 |
| 發明（設計）人： | 李夢倩 | 申請（專利權）人： | 四川大學華西醫院 |
| 主分類號： | C12N15/113 | 分類號： | C12N15/113;C12N15/11;C12N15/63;C12N1/21 |
| 代理公司： | 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222 | 代理人： | 李安霞 |
| 地址： | 610000 四*** | 國省代碼： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 抑制 hsa_circ_0001610 表達 shrna 及其 載體 | ||
1.一種抑制hsa_circ_0001610表達的shRNA，其特征在于，其靶點序列如SEQ ID NO.4所示。
2.如權利要求1所述的shRNA，其特征在于：表達該shRNA的DNA的正義鏈序列如SEQ IDNO.2所示。
3.一種雙鏈寡核苷酸，其特征在于：其正義鏈序列如SEQ ID NO.2所示，反義鏈序列如SEQ ID NO.3所示。
4.一種抑制hsa_circ_0001610表達的shRNA的表達載體，其特征在于：所述載體包括表達權利要求1或2所述的shRNA的DNA序列。
5.如權利要求4所述的載體，其特征在于：所述載體是將表達權利要求1或2所述的shRNA的DNA序列插入PLKO.1-TRC載體得到的重組載體。
6.如權利要求4或5所述的載體，其特征在于：所述表達權利要求1或2所述的shRNA的DNA為權利要求3所述的雙鏈寡核苷酸。
7.權利要求6所述載體的構建方法，其特征在于：包括如下步驟：
1)合成寡核苷酸：將序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3的引物先進行變性，再進行退火，得雙鏈寡核苷酸；
2)對PLKO.1-TRC進行Age1和EcoR1雙酶切，得2個片段，回收較大片段；
3)將步驟1)所得雙鏈寡核苷酸和步驟2)所得較大片段使用T4連接酶連接。
8.如權利要求7所述的方法，其特征在于：步驟1)的變性程序為：98℃5min。
9.如權利要求7所述的方法，其特征在于：步驟1)的退火程序為：初始溫度95℃，持續8s，以后按照每8s下調溫度0.1℃，共下調800次。
10.一種重組細菌，其特征在于：所述細菌包含權利要求4～6任一所述的載體。
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