[發明專利]一種鑒別豬偽狂犬病毒基因缺失疫苗株和野毒株的熒光定量PCR檢測試劑盒

在審

• 申請號: 202110449294.6
• 申請日: 2021-04-25
• 公開（公告）號: CN113136456A
• 公開（公告）日: 2021-07-20
• 發明（設計）人: 湯細彪;黃超;黃英;陳翔鴻;謝思思;楊柳;宋文博;賈雙;龍云志;李倩倩;劉錦錦;梁鞏
• 申請（專利權）人: 武漢科前生物股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 錢云

1.熒光定量PCR檢測鑒別豬偽狂犬病毒gI/gE基因缺失疫苗株和野毒株的引物和探針，其特征在于，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2所示；所述探針的核苷酸序列如SEQID NO.3所示。

2.根據權利要求1所述的引物和探針，其特征在于，所述豬偽狂犬病毒gI/gE基因缺失疫苗株為HB98和HB2000。

3.一種熒光定量PCR檢測鑒別豬偽狂犬病毒gI/gE基因缺失疫苗株和野毒株的試劑盒，其特征在于，包含權利要求1所述的引物和探針。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還包括陰性對照、陽性對照，所述陽性對照為經實驗室檢測是PRV陽性樣品的核酸，所述陰性對照為經實驗室檢測是PRV陰性樣品的核酸。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還包括，基于化學法修飾的熱啟動DNA聚合酶、dUTP/UNG防污染系統、抗PCR抑制物因子。

6.一種用于非疾病診斷目的鑒別豬偽狂犬病毒疫苗株與野毒株的方法，其特征在于，使用權利要求1所述的引物和探針或權利要求3-5任一項所述的試劑盒對待測樣品進行qPCR擴增反應。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述待測樣品為豬血清、糞便、精液、組織、細胞培養物等樣品中的豬偽狂犬病病毒的DNA。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，qPCR反應體系為2×primer-one step-mix，10μl；F-primer，0.5μl；R-primer，0.5μl；Probe，1μl；Rnase-Free-H₂O，6μl；DNA，2μl；qPCR反應程序為：95℃，2min；95℃，10s；60℃，35s；40個循環。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，qPCR擴增反應的結果判定標準為：

(1)樣本Ct值≤35，判斷樣本為陽性；

(2)35＜樣本Ct值≤38，若擴增曲線對數擴增曲線，判斷為可疑陽性樣本，否則判斷樣本為陰性；

對可疑陽性樣本進行復檢，若復檢樣本Ct值≤35，判斷可疑陽性樣本為陽性，否則判斷樣本為陰性；

(3)樣本無Ct值或Ct值＞38，判斷樣本為陰性。

10.權利要求1-2任一項所述引物和探針，或權利要求3-5任一項所述的試劑盒，或權利要求6-9任一項所述的方法在豬偽狂犬病毒流行病學調查中的應用。