[發明專利]一種產乳酰-N-新四糖的基因工程菌及生產方法

有效

• 申請號: 202110447082.4
• 申請日: 2021-04-25
• 公開（公告）號: CN113136357B
• 公開（公告）日: 2022-10-11
• 發明（設計）人: 張濤;江波;胡苗苗;李夢麗
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12N15/56;C12N15/54;C12N15/61;C12P19/26;C12R1/19
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 林娟

1.一種產乳酰-N-新四糖的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌沉默表達β-半乳糖苷酶基因lacZ，并過表達β-1，3-乙酰葡萄糖胺轉移酶基因lgtA、β-1，4-半乳糖基轉移酶基因lgtB、磷酸葡萄糖突變酶基因pgm、UDP-葡萄糖4-表異構酶基因galE、半乳糖-1-磷酸尿嘧啶轉移酶基因galT、半乳糖激酶基因galK和β-半乳糖苷通透酶基因lacY；

所述β-1，3-乙酰葡萄糖胺轉移酶基因lgtA和β-1，4-半乳糖基轉移酶基因lgtB均來源于腦膜炎奈瑟球菌（Neisseriaceae meningitidis），所述β-1，3-乙酰葡萄糖胺轉移酶基因lgtA的核苷酸序列如SEQ ID NO .1所示，β-1，4-半乳糖基轉移酶基因lgtB的核苷酸序列如SEQ ID NO .2所示；

所述磷酸葡萄糖突變酶基因pgm、UDP-葡萄糖4-表異構酶基因galE、半乳糖-1-磷酸尿嘧啶轉移酶基因galT、半乳糖激酶基因galK、β-半乳糖苷通透酶基因lacY和β-半乳糖苷酶基因lacZ均來源于大腸桿菌（Escherichia coli）K-12，磷酸葡萄糖突變酶基因pgm的GeneID為945271，UDP-葡萄糖4-表異構酶基因galE的Gene ID為945354，半乳糖-1-磷酸尿嘧啶轉移酶基因galT的Gene ID為945357，半乳糖激酶基因galK的Gene ID為945358，β-半乳糖苷通透酶基因lacY的Gene ID為949083，β-半乳糖苷酶基因lacZ的Gene ID為945006。

2.根據權利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌以pETDuet-1質粒表達基因lacY，以pRSFDuet-1質粒表達基因pgm、galE、galT和galK，以pCDFDuet-1質粒表達基因lgtA和lgtB。

3.一種發酵法生產乳酰-N-新四糖的方法，其特征在于，將權利要求1或2所述的基因工程菌經種子培養獲得種子液；再將種子液接種于發酵體系中，經誘導后，獲得含乳酰-N-新四糖的發酵液。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述發酵體系中的碳源為葡萄糖、半乳糖和甘油中的一種或多種。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述碳源為甘油，或為甘油和半乳糖的混合物。

6.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法中的種子培養基為LB液體培養基；所述種子培養的條件為35℃~40℃，200 rpm ~250 rpm，搖瓶培養10 h~14 h。