[發明專利]miR-29a-3p inhibitor體外誘導人體mBreg細胞的用途及方法

有效

• 申請號: 202110444251.9
• 申請日: 2021-04-23
• 公開（公告）號: CN113512528B
• 公開（公告）日: 2022-04-22
• 發明（設計）人: 夏永祥;李近陽
• 申請（專利權）人: 江蘇省人民醫院（南京醫科大學第一附屬醫院）
• 主分類號: C12N5/0781
• 分類號: C12N5/0781
• 代理公司: 南京科知維創知識產權代理有限責任公司 32270
• 代理人: 杜依民

本發明提出一種miR?29a?3p inhibitor在體外誘導人體mBreg細胞的用途及方法，采用miR?29a?3p inhibitor在體外誘導人體mBreg細胞，進一步的，miR?29a?3p inhibitor誘導CD19⁺B細胞向mBreg細胞轉化，mBreg細胞為CD19⁺CD24^hiCD27⁺Breg細胞亞群；本發明利用miR?29a?3p inhibitor體外誘導人體mBreg細胞的方法，純度高、細胞活性損傷小，轉化效率高，細胞活性高，來源廣，污染可能性小，能夠彌補目前mBreg基礎和臨床研究上數量不足的缺陷。

技術領域

本發明涉及分離純化和誘導細胞領域，具體的說是人miR-29a-3p inhibitor在體外誘導人體mBreg細胞的用途以及分離和誘導mBreg細胞的方法。

背景技術

目前在動物模型和臨床患者中均證實Breg在移植急、慢性排斥的發生中均起到重要作用，檢測Breg不但可以預測術后患者發生急、慢性排斥的風險，動物實驗中還發現過繼性輸注Breg可以緩解排斥反應。mBreg細胞可以通過分泌IL‐10和涉及CTLA-4的細胞間接觸來抑制T細胞的增殖和抑制作用，從而提供保護，維持機體免疫平衡。但是Breg因為在人體內數量極少，在體外存活時間較短，且無法有效由普通B細胞誘導，目前實驗多局限于動物模型，目前的Breg過繼回輸實驗也存在很大的局限性。因此要對Breg細胞的進一步深入的研究，首先要建立一種高效的細胞分離和誘導方法。

Breg的主要特征是產生并分泌白細胞介素IL-10和(或)轉化生長因子TGF-β等細胞因子，從而起到抑制炎癥反應的負向調節作用，但是目前還沒有公認的Breg細胞的表型，其中CD19⁺CD24^hiCD27⁺是目前研究最為廣泛的Breg，且這群細胞在肝移植患者發生慢性排斥時顯著降低，可以用來預測肝移植術后急性排斥的發生。目前世界上誘導Breg的方式主要通過BAFF（B-cell activating factor）對普通B細胞進行誘導，而該技術誘導純度僅10~30%左右，得到的量較少，無法滿足進一步科研和臨床研究的需要。

MicroRNA是一類小的非編碼RNA, 通過與靶基因的3’-非翻譯區通過堿基對的互補結合抑制其翻譯或降解其mRNA從而下調靶蛋白的表達水平。MicroRNA 通過影響靶基因的表達而調控許多生理和疾病過程。目前已有研究證實MicroRNA在免疫細胞的生長分化中起到關鍵作用，并進一步參與到肝移植術后急性排斥的發生中。我們希望通過調控B細胞中的miR-29a-3p的表達促進B細胞向CD19⁺CD24^hiCD27⁺ Breg細胞分化從而達到臨床研究和治療的需要。

細胞治療是目前有望在自身免疫性疾病，器官排斥等領域取得一定療效的治療方法，最近Breg的過繼性輸注成為細胞治療的新分支，但是一直限制Breg細胞臨床應用的主要問題是Breg細胞來源比較少，目前的體外誘導效率低并且其活性也低。

發明內容

為了解決Breg細胞來源少，體外誘導效率低并且其活性也低的技術問題，本發明提出一種miR-29a-3p inhibitor在體外誘導人體Breg細胞的用途。miR-29a-3p通過結合于NFAT5靶基因的3’UTR區域促進NFAT5蛋白的降解，NFAT5信號通路是體內免疫細胞的重要通路，在免疫穩態中起著重要作用，發明人在試驗中偶然發現可以利用miR-29a-3pinhibitor誘導普通B細胞向mBreg細胞轉化，從而為基礎和臨床人體mBreg相關研究提供新的方法。

由此，申請人提出了一種miR-29a-3p inhibitor在體外誘導人體mBreg細胞的用途，以及利用miR-29a-3p inhibitor體外誘導人體mBreg細胞的方法。