[發(fā)明專利]一種用于壞死性小腸結腸炎研究的細胞模型及其構建方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110443051.1
• 申請日: 2021-04-23
• 公開（公告）號: CN113174409A
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發(fā)明（設計）人: 周寅
• 申請（專利權）人: 四川大學華西醫(yī)院
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;C12N5/10
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

1.一種用于壞死性小腸結腸炎研究的細胞模型的構建方法，其特征在于：它是用病毒誘導細胞的MYD88基因沉默得到細胞模型。

2.根據(jù)權利要求1所述的構建方法，其特征在于：所述病毒為重組慢病毒；所述重組慢病毒中包含沉默MYD88基因的shRNA，所述shRNA序列為5’-GACAGACTATCGGCTTAAATTCTCGAGAATTTAAGCCGATAGTCTGTC-3’。

3.根據(jù)權利要求1或2所述的構建方法，其特征在于：所述誘導的步驟為：

1)取細胞，培養(yǎng)至細胞匯合度達到20～60％，得待轉染細胞；

2)取DMEM培養(yǎng)基，加入慢病毒，混勻，再加入多聚陽離子化合物Polybrene，得含毒培養(yǎng)基；

3)取步驟2)含毒培養(yǎng)基，覆蓋于步驟1)待轉染細胞上，培養(yǎng)8～12h，移除含毒培養(yǎng)基，加入DMEM培養(yǎng)基，再培養(yǎng)24h以上，即得壞死性小腸結腸炎細胞模型。

4.根據(jù)權利要求3所述的構建方法，其特征在于：所述細胞為大鼠腸上皮細胞株IEC-6；或，所述培養(yǎng)的條件為溫度37℃，CO₂濃度5％。

5.根據(jù)權利要求3所述的構建方法，其特征在于：步驟1)所述培養(yǎng)至細胞匯合度達到30～50％。

6.根據(jù)權利要求3所述的構建方法，其特征在于：步驟2)所述DMEM培養(yǎng)基的用量為使之覆蓋于培養(yǎng)器皿表面為止；所述慢病毒的用量為感染復數(shù)MOI20；所述含毒培養(yǎng)基中多聚陽離子化合物Polybrene的濃度為2～7ug/mL，優(yōu)選5ug/mL。

7.根據(jù)權利要求2或6所述的構建方法，其特征在于：所述DMEM培養(yǎng)基中含有胎牛血清，其中胎牛血清與DMEM培養(yǎng)基的質量比為10：90。

8.根據(jù)權利要求7所述的構建方法，其特征在于：所述DMEM培養(yǎng)基為DMEM高糖培養(yǎng)基，優(yōu)選Gibco DMEM高糖液體培養(yǎng)基。

9.一種用于壞死性小腸結腸炎研究的細胞模型，其特征在于：它是按照權利要求1～8任意一種方法制備的MYD88基因沉默的細胞模型；所述細胞為IEC-6細胞。

10.權利要求9所述MYD88基因沉默細胞模型作為壞死性小腸結腸炎模型中的應用。