[發(fā)明專利]一種檢測(cè)BVDV、BCoV、BRV和IBRV的多重?zé)晒舛縋CR方法及試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110441844.X
• 申請(qǐng)日: 2021-04-23
• 公開（公告）號(hào): CN113136455A
• 公開（公告）日: 2021-07-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 秦建華;高亞桃;李妍;史萬玉;劉立元;王猛;郭姚蕊;劉勝麗;王傳文;包永占;趙月蘭
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京科億知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350
• 代理人: 李興林

1.一種用于檢測(cè)BVDV、BCoV、BRV和IBRV的多重SYBR Green I熒光定量PCR引物組，其特征在于，所述引物組包括4對(duì)引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.8所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的引物組在檢測(cè)BVDV、BCoV、BRV和IBRV的非疾病診斷目的或在制備BVDV、BCoV、BRV和IBRV檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用。

3.一種檢測(cè)BVDV、BCoV、BRV和IBRV的非疾病診斷目的的多重SYBR Green I熒光定量PCR方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)提取樣本核酸，并進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄；

(2)使用引物SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.8對(duì)步驟(1)中反轉(zhuǎn)錄得到的混合物以及4種病毒的陽性質(zhì)粒分別進(jìn)行多重?zé)晒舛縋CR擴(kuò)增反應(yīng)，得到PCR擴(kuò)增曲線；

(3)根據(jù)步驟(2)中得到的擴(kuò)增曲線進(jìn)行結(jié)果分析。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中多重?zé)晒舛縋CR的擴(kuò)增體系中各組分總濃度如下所示：Green qPCR SuperMix 12.5μL，各上、下游引物終濃度分別為0.2uM/uL，模板/質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品2μL，用ddH₂O補(bǔ)足25uL。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中多重?zé)晒舛縋CR的擴(kuò)增程序?yàn)椋?5℃300s、95℃10s、57℃10s，72℃25s，共40個(gè)循環(huán)。

6.權(quán)利要求3-5任一項(xiàng)所述的方法在制備BVDV、BCoV、BRV和IBRV檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用。

7.一種檢測(cè)BVDV、BCoV、BRV和IBRV的試劑盒，其特征在于，包含權(quán)利要求1所述的引物組。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的試劑盒，其特征在于，還包括BVDV、BCoV、BRV和IBRV陽性質(zhì)粒。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的試劑盒，其特征在于，還包括熒光定量PCR所需的試劑。

10.權(quán)利要求7-9任一項(xiàng)所述試劑盒在BVDV、BCoV、BRV和IBRV檢測(cè)中的非疾病診斷目的的應(yīng)用。