[發(fā)明專利]一種評(píng)價(jià)病毒滅活口罩對(duì)病毒滅活效率的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110440984.5
• 申請(qǐng)日: 2021-04-23
• 公開（公告）號(hào): CN113046411A
• 公開（公告）日: 2021-06-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王妙;張成;韓溟;劉東鳴;劉博;何晴;丁鴿;陳博宇;王亞琪;王曉東;許文鋒;王燕慧;明文娟
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 陜西省醫(yī)療器械質(zhì)量檢驗(yàn)院
• 主分類號(hào): C12Q1/22
• 分類號(hào): C12Q1/22
• 代理公司: 北京八月瓜知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11543
• 代理人: 李斌

1.一種評(píng)價(jià)病毒滅活口罩對(duì)病毒滅活效率的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1.將宿主細(xì)胞感染病毒，加入培養(yǎng)基后置于CO₂培養(yǎng)箱培養(yǎng)，獲得含病毒細(xì)胞，將含病毒細(xì)胞凍融、離心、取上清液、過濾，獲得病毒懸液，備用；

S2.將宿主細(xì)胞加入細(xì)胞培養(yǎng)板，置于CO₂培養(yǎng)箱培養(yǎng)，獲得宿主細(xì)胞板，備用；

S3.將口罩置于環(huán)境試驗(yàn)箱中進(jìn)行溫度預(yù)處理，恢復(fù)至室溫，獲得待測口罩，備用；

S4.將步驟S1得到的病毒懸液制備成氣溶膠顆粒，模擬人體呼吸作用，使氣溶膠顆粒與步驟S3得到的待測口罩充分接觸，獲得負(fù)載病毒的待測口罩；

S5.剪取步驟S4得到的負(fù)載病毒的待測口罩中心處材料作為樣本，將樣本浸于含胎牛血清的培養(yǎng)基中，獲得病毒測試液；

S6.將病毒測試液進(jìn)行連續(xù)10倍稀釋，將稀釋后的病毒測試液分別加入步驟S2得到的宿主細(xì)胞板中，獲得培養(yǎng)板；

S7.將培養(yǎng)板置于CO₂培養(yǎng)箱培養(yǎng)，每日觀察細(xì)胞病變情況，記錄病變細(xì)胞孔的數(shù)目；

S8.將無殺菌和抗病毒成分的普通醫(yī)用口罩作為陽性對(duì)照組，處理方法同步驟S3～S7；

S9.分別計(jì)算樣品組和陽性對(duì)照組中病毒測試液的病毒滴度值，進(jìn)而計(jì)算出病毒滅活口罩的滅活效率。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種評(píng)價(jià)病毒滅活口罩對(duì)病毒滅活效率的方法，其特征在于，步驟S4在口罩滅活效率檢測的預(yù)處理裝置中進(jìn)行，口罩滅活效率檢測的預(yù)處理裝置包括氣霧室，氣霧室的進(jìn)口通過管道與霧化器的出口連接，氣霧室的內(nèi)部設(shè)有放樣臺(tái)，放樣臺(tái)位于氣霧室的進(jìn)口與氣霧室的出口之間，氣霧室的出口通過管道與呼吸模擬裝置連接；

將待測口罩放置在放樣臺(tái)上，采用霧化器將步驟S1得到的病毒懸液制備成氣溶膠顆粒，將氣溶膠顆粒通過管道輸送到氣霧室中，與待測口罩的外表面充分接觸，采用呼吸模擬裝置模擬人體呼吸作用，使氣溶膠顆粒與待測口罩充分接觸，獲得負(fù)載病毒的待測口罩。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種評(píng)價(jià)病毒滅活口罩對(duì)病毒滅活效率的方法，其特征在于，放樣臺(tái)與氣霧室的內(nèi)壁密封連接，放樣臺(tái)上設(shè)有放樣口和環(huán)形夾具，放樣口和環(huán)形夾具均為橢圓形；氣溶膠顆粒的直徑為1～5μm。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種評(píng)價(jià)病毒滅活口罩對(duì)病毒滅活效率的方法，其特征在于，呼吸模擬裝置包括彈性氣囊和氣缸，彈性氣囊的頂部設(shè)有擠壓板，氣缸的活塞桿與擠壓板連接，氣缸通過電磁閥與時(shí)間繼電器連接；彈性氣囊的排氣量為300～700mL/次，彈性氣囊的擠壓頻率為10～30次/min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種評(píng)價(jià)病毒滅活口罩對(duì)病毒滅活效率的方法，其特征在于，步驟S1為：將宿主細(xì)胞感染病毒，加入培養(yǎng)基后置于37℃、5％的CO₂培養(yǎng)箱培養(yǎng)，次日起觀察細(xì)胞病變情況，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到75～95％病變時(shí)獲得含病毒細(xì)胞，將含病毒細(xì)胞在-80℃的超低溫冰箱完全冷凍后，置于37℃水浴鍋融化，反復(fù)兩次，在2800～3200rpm下離心13～17min，取上清液，采用0.22μm濾膜過濾，獲得病毒懸液，備用；

步驟S2為：將宿主細(xì)胞以6×10⁴個(gè)/mL的密度加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔0.1mL，置于37℃、5％的CO₂培養(yǎng)箱培養(yǎng)，獲得宿主細(xì)胞板，備用。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種評(píng)價(jià)病毒滅活口罩對(duì)病毒滅活效率的方法，其特征在于，步驟S3為：將口罩置于環(huán)境試驗(yàn)箱中進(jìn)行溫度預(yù)處理，在67～73℃放置23～25h，在-33～-27℃放置23～25h，恢復(fù)至室溫4h以上，獲得待測口罩，備用。