[發(fā)明專利]一種用于重組表達棘白菌素B脫酰基酶的表達盒及應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110437554.8 | 申請日： | 2021-04-22 |
| 公開（公告）號： | CN113174398B | 公開（公告）日： | 2022-04-29 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 柳志強;鄒樹平;鄭裕國;牛坤;韓鑫;朱寒悅 | 申請（專利權(quán)）人： | 浙江工業(yè)大學(xué) |
| 主分類號： | C12N15/70 | 分類號： | C12N15/70;C12N15/62;C12N1/21;C12N9/80;C12R1/19 |
| 代理公司： | 杭州天勤知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33224 | 代理人： | 沈金龍 |
| 地址： | 310014 浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 用于 重組 表達 菌素 脫酰基酶 應(yīng)用 | ||
1.一種用于重組表達棘白菌素B脫酰基酶的表達盒，其特征在于，包括依次連接的啟動子核酸序列、RBS核酸序列、編碼OmpA信號肽的核酸序列、編碼第一促溶肽的核酸序列、編碼棘白菌素B脫酰基酶α亞基的核酸序列、第一終止密碼子、RBS核酸序列、編碼OmpA信號肽的核酸序列、編碼棘白菌素B脫酰基酶β亞基的核酸序列、編碼第二促溶肽的核酸序列、第二終止密碼子，
其中，第一促溶肽的氨基酸序列為：GEGEG；第二促溶肽的氨基酸序列為：KKKKKK。
2.如權(quán)利要求1所述的表達盒，其特征在于，RBS核酸序列：TTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGA；編碼OmpA信號肽的核酸序列：ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTAGCGCAGGCC；編碼棘白菌素B脫酰基酶α亞基的核酸序列與第一終止密碼子的核酸序列：如SEQ ID No.6所示；編碼棘白菌素B脫酰基酶β亞基的核酸序列：如SEQ ID No.7所示。
3.如權(quán)利要求2所述的表達盒，其特征在于，不包括啟動子的核酸序列如SEQ ID No.24所示。
4.如權(quán)利要求1～3任一所述表達盒在重組表達棘白菌素B脫酰基酶中的應(yīng)用。
5.包含如權(quán)利要求1～3任一所述表達盒的重組表達載體。
6.包含如權(quán)利要求5所述重組表達載體的基因工程菌，其特征在于，由宿主菌中轉(zhuǎn)入所述重組表達載體得到。
7.如權(quán)利要求6所述基因工程菌，其特征在于，宿主菌為大腸桿菌。
8.一種用于重組表達棘白菌素B脫酰基酶的方法，其特征在于，將權(quán)利要求7所述基因工程菌在培養(yǎng)基中發(fā)酵表達棘白菌素B脫酰基酶。
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述基因工程菌用濃度為0.2～0.6mM的IPTG誘導(dǎo)；IPTG誘導(dǎo)時間5～20h；發(fā)酵溫度16℃～24℃。
10.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述基因工程菌用濃度為0.4mM的IPTG誘導(dǎo)；IPTG誘導(dǎo)時間15h；發(fā)酵溫度20℃。
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