[發(fā)明專利]一種酸性蛋白酶高效表達的方法及其應用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110436308.0 | 申請日： | 2021-04-22 |
| 公開（公告）號： | CN112920280B | 公開（公告）日： | 2022-07-05 |
| 發(fā)明（設計）人： | 吳丹;鄭璞;陳鵬程;魏夢園 | 申請（專利權(quán)）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C07K19/00 | 分類號： | C07K19/00;C12N9/58;C12N9/64;C12N15/62;C12N15/81;C12N1/19;C12G1/022;C12R1/84;C12R1/865 |
| 代理公司： | 哈爾濱市陽光惠遠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211 | 代理人： | 彭素琴 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 酸性 蛋白酶 高效 表達 方法 及其 應用 | ||
1.一種融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白為N端連接有增強型α-信號肽的酸性蛋白酶；所述酸性蛋白酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述增強型α-信號肽的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
2.表達權(quán)利要求1所述融合蛋白的載體。
3.含有權(quán)利要求1所述融合蛋白或權(quán)利要求2所述載體的重組菌株。
4.如權(quán)利要求3所述的重組菌株，其特征在于，所述重組菌株以畢赤酵母為宿主，以pPIC9K為載體。
5.如權(quán)利要求4所述的重組菌株，其特征在于，所述畢赤酵母包括Pichia.pastorisGS115、KM71和X33。
6.一種構(gòu)建權(quán)利要求3所述重組菌株的方法，其特征在于，所述方法具體步驟如下所示：(1)將酸性蛋白酶和增強型α-信號肽連接并插入到表達載體pUC57中，獲得重組載體pUC57-enα-SP-acidprotea；(2)以步驟(1)中的重組載體pUC57-enα-SP-acidprotea為模板，擴增含有酸性蛋白酶和增強型α-信號肽的目的片段并插入到表達載體pPIC9K，獲得重組載體pPIC9K-en-αSP-acidprotea；(3)線性化步驟(2)中的重組載體并轉(zhuǎn)化至畢赤酵母，獲得重組菌株。
7.一種提高酸性蛋白酶表達量的方法，其特征在于，所述方法為：在酸性蛋白酶基因序列的N端連接增強型α-信號肽的基因序列；所述增強型α-信號肽的核苷酸序列如SEQ IDNO.4；所述酸性蛋白酶包括動物源或真菌源的酸性蛋白酶；所述酸性蛋白酶的序列如SEQID NO.2所示。
8.權(quán)利要求1所述的融合蛋白或權(quán)利要求3所述的重組菌株在分解酪蛋白方面的應用。
9.權(quán)利要求1所述的融合蛋白或權(quán)利要求3所述的重組菌株在飼料、釀造或食品領域中的應用。
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