[發明專利]一種適用于茶葉中啶蟲脒殘留高通量檢測的方法

在審

• 申請號: 202110435772.8
• 申請日: 2021-04-22
• 公開（公告）號: CN113176405A
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發明（設計）人: 魏新林;丁然;彭斕蘭;李靖;王元鳳;徐乃豐
• 申請（專利權）人: 上海交通大學;上海師范大學
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/535;G01N21/33;G01N21/31;G01N1/38
• 代理公司: 上海科盛知識產權代理有限公司 31225
• 代理人: 蔣亮珠

本發明涉及一種適用于茶葉中啶蟲脒殘留高通量檢測的方法，該方法為：使用稀釋法處理茶葉樣品，在檢測過程中以啶蟲脒為目標物，利用抗原、抗體的特異性識別體系及鉑包金納米粒子標記IgG的類酶催化活性，催化氧化顯色底物產生氧化產物，從而實現茶葉中啶蟲脒殘留高通量定量檢測。與現有技術相比，本發明具有不易受環境影響、成本低、通量大、可廣譜性低檢測六大類茶葉等優點。

技術領域

本發明涉及ELISA檢測技術領域，具體涉及一種適用于茶葉中啶蟲脒殘留高通量檢測的方法。

背景技術

啶蟲脒屬于第一代新煙堿類農藥，易溶于甲醇等有機溶劑，在pH＝9及45℃的環境中會發生緩慢降解，具有光穩定性。它殺蟲效率高、活性強且持久、與常用農藥不存在交互抗性，是一種被廣泛應用的商品化氯化煙堿類殺蟲劑。農戶一般使用噴灑的方式對土壤及枝葉使用啶蟲脒，從而防治茶葉上的半翅目、纓翅目等害蟲。目前，啶蟲脒殘留的檢測方法主要包括色譜分析方法、色譜串聯質譜分析法、免疫學分析方法等。

其中，免疫學分析方法中的ELISA方法因具有無需復雜設備，能實現高通量檢測，特異性強等優點，已成為一種熱門的檢測方法。由于茶葉中生物活性物質豐富，因而在檢測時易產生較嚴重的基質效應。基質效應是指在生物分析中，樣品中存在的基質成分影響待測物質檢測結果的現象。六大茶類中各類茶的化學成分組成比例差異較大，因而其基質效應也各不相同。稀釋是樣品前處理中最常見的一種消除基質效應的方法，它具有簡便快捷、成本低、無需復雜設備的優點。

在已公開的啶蟲脒殘留免疫學檢測方法中，存在以下問題：(1)部分方法涉及天然酶，檢測結果易受環境影響。如中國專利CN201811104470.7公開了一種檢測啶蟲脒的酶聯免疫試劑盒及其應用，該方法中使用的酶均為諸如辣根過氧化物酶或細菌提取堿性磷酸酯酶等天然酶。(2)缺少適用于茶葉中啶蟲脒殘留檢測的高通量方法。如中國專利CN201510608015.0公開了一種適用于茶葉中啶蟲脒殘留的速測方法及相應的試紙條，雖然涉及了六大類茶葉的實際應用，但該檢測方法一次只能檢測一個樣品，不適用于高通量檢測。

發明內容

本發明的目的就是為了克服上述現有技術存在的缺陷而提供一種不易受環境影響、成本低、通量大、可廣譜性低檢測六大類茶葉的適用于茶葉中啶蟲脒殘留高通量檢測的方法。

本發明的目的可以通過以下技術方案來實現：

一種適用于茶葉中啶蟲脒殘留高通量檢測的方法，該方法為：使用稀釋法處理茶葉樣品，在檢測過程中以啶蟲脒為目標物，利用抗原、抗體的特異性識別體系及鉑包金納米粒子標記IgG的類酶催化活性，催化氧化顯色底物產生氧化產物，從而實現茶葉中啶蟲脒殘留高通量定量檢測。

進一步地，該方法包括以下步驟：

(1)茶葉樣品前處理：將茶葉樣品加入至沸水中萃取后，收集茶湯，并使用有機系過濾膜過濾，再使用PBS緩沖液稀釋濾液，得到茶湯稀釋樣品用于檢測；

(2)包被：將啶蟲脒抗原固定在反應器皿(96孔微量滴定板)上，并除去多余的抗原；

(3)封閉：再在反應器皿(96孔微量滴定板)上加入封閉液以減少非特異性吸附，并除去多余的封閉液；

(4)間接競爭：繼續在反應器皿(96孔微量滴定板)上加入茶湯稀釋樣品和啶蟲脒抗體，茶湯稀釋樣品中的啶蟲脒與啶蟲脒抗原爭相結合啶蟲脒抗體；

競爭結束后，除去與茶湯稀釋樣品中啶蟲脒結合的啶蟲脒抗體和多余的啶蟲脒抗體，使反應器皿(96孔微量滴定板)上只留下抗原-抗體復合物和未結合的啶蟲脒抗原；