[發(fā)明專利]一種適用于茶葉中啶蟲(chóng)脒殘留高通量檢測(cè)的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110435772.8
• 申請(qǐng)日: 2021-04-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113176405A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-07-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 魏新林;丁然;彭斕蘭;李靖;王元鳳;徐乃豐
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué);上海師范大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/543
• 分類號(hào): G01N33/543;G01N33/535;G01N21/33;G01N21/31;G01N1/38
• 代理公司: 上海科盛知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31225
• 代理人: 蔣亮珠

1.一種適用于茶葉中啶蟲(chóng)脒殘留高通量檢測(cè)的方法，其特征在于，該方法為：使用稀釋法處理茶葉樣品，在檢測(cè)過(guò)程中以啶蟲(chóng)脒為目標(biāo)物，利用抗原、抗體的特異性識(shí)別體系及鉑包金納米粒子標(biāo)記IgG的類酶催化活性，催化氧化顯色底物產(chǎn)生氧化產(chǎn)物，從而實(shí)現(xiàn)茶葉中啶蟲(chóng)脒殘留高通量定量檢測(cè)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種適用于茶葉中啶蟲(chóng)脒殘留高通量檢測(cè)的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

(1)茶葉樣品前處理：將茶葉樣品加入至沸水中萃取后，收集茶湯，并使用有機(jī)系過(guò)濾膜過(guò)濾，再使用PBS緩沖液稀釋濾液，得到茶湯稀釋樣品用于檢測(cè)；

(2)包被：將啶蟲(chóng)脒抗原固定在反應(yīng)器皿上；

(3)封閉：再在反應(yīng)器皿上加入封閉液以減少非特異性吸附；

(4)間接競(jìng)爭(zhēng)：繼續(xù)在反應(yīng)器皿上加入茶湯稀釋樣品和啶蟲(chóng)脒抗體，茶湯稀釋樣品中的啶蟲(chóng)脒與啶蟲(chóng)脒抗原爭(zhēng)相結(jié)合啶蟲(chóng)脒抗體；

競(jìng)爭(zhēng)結(jié)束后，除去與茶湯稀釋樣品中啶蟲(chóng)脒結(jié)合的啶蟲(chóng)脒抗體和多余的啶蟲(chóng)脒抗體，使反應(yīng)器皿上只留下抗原-抗體復(fù)合物；

(5)放大信號(hào)：加入鉑包金納米粒子標(biāo)記的IgG，使其與反應(yīng)器皿上的抗原-抗體復(fù)合物結(jié)合形成抗原-抗體-鉑包金納米粒子標(biāo)記IgG復(fù)合物；在反應(yīng)器皿上加入顯色劑以形成催化氧化產(chǎn)物，恒溫孵育一段時(shí)間后加入終止液，得到信號(hào)放大液；

(6)定量檢測(cè)：用酶標(biāo)儀測(cè)定信號(hào)放大液吸光光度值，利用吸光度的變化來(lái)獲得茶湯中啶蟲(chóng)脒的含量；以啶蟲(chóng)脒物質(zhì)濃度的對(duì)數(shù)形式為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制抑制標(biāo)準(zhǔn)曲線，最終完成茶葉中啶蟲(chóng)脒殘留高通量檢測(cè)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種適用于茶葉中啶蟲(chóng)脒殘留高通量檢測(cè)的方法，其特征在于，所述的鉑包金納米粒子標(biāo)記IgG中，鉑包金納米粒子為金核鉑殼納米粒子，粒徑為10-100nm，IgG為羊抗小鼠IgG，所述的鉑包金納米粒子與IgG之比為1mm³:(0.1-1)mg。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種適用于茶葉中啶蟲(chóng)脒殘留高通量檢測(cè)的方法，其特征在于，所述的金核粒徑為10-100nm，鉑殼厚度為1.5-10nm。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種適用于茶葉中啶蟲(chóng)脒殘留高通量檢測(cè)的方法，其特征在于，所述的鉑包金納米粒子標(biāo)記IgG的制備方法包括以下步驟：

St1.金核制備：將HAuCl₄溶液攪拌至沸，保持沸騰狀態(tài)后快速加入檸檬酸鈉溶液，繼續(xù)加熱攪拌至溶液顏色不再變化，持續(xù)加熱至溶液呈澄清透亮狀態(tài)后停止反應(yīng)，冷卻至室溫，儲(chǔ)藏備用；

St2.鉑包金制備：將AuNPs溶液與H₂PtCl₆溶液和H₂O混合、攪拌、加熱后，再加入L-抗壞血酸溶液，持續(xù)加熱后停止反應(yīng)，冷卻至室溫，得到鉑包金納米粒子溶液，儲(chǔ)藏備用；

St3.鉑包金納米粒子與IgG偶聯(lián)：將鉑包金納米粒子溶液pH調(diào)整為7-9，隨后添加IgG，然后震蕩混勻、恒溫孵育后；離心-棄上清液，并加入的PBS緩沖液，重復(fù)兩次；最終得到鉑包金納米粒子標(biāo)記IgG。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種適用于茶葉中啶蟲(chóng)脒殘留高通量檢測(cè)的方法，其特征在于，

St1中所述的HAuCl₄和檸檬酸鈉溶液的體積比為(40-60):1；

St2中所述的AuNPs溶液、H₂PtCl₆溶液、H₂O和L-抗壞血酸溶液的體積比為30:(0.4-0.5):(15-20):(2-2.5)。