[發(fā)明專利]一種產(chǎn)唾液酸乳糖的重組宿主菌及其構(gòu)建方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110433652.4
• 申請(qǐng)日: 2021-04-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113151133B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-04-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳金勇;李忠奎;陳祥松;袁麗霞;王紀(jì);王煜;王剛;孫立潔;李翔宇;姚建銘
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院合肥物質(zhì)科學(xué)研究院;武漢中科光谷綠色生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/21
• 分類號(hào): C12N1/21;C12N15/70;C12N15/31;C12P19/26;C12R1/19
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利商標(biāo)代理有限公司 44202
• 代理人: 顏希文

1.一種產(chǎn)唾液酸乳糖的重組宿主菌，其特征在于，所述重組宿主菌選自以下菌株：

SL4菌株：BL21star(DE3)ΔlacZΔnanETKAΔnagB/pCOLADuet-BCA-ST/pACYCDuet-PPK-CMK；

SL7菌株：BL21?star(DE3)ΔlacZΔnanETKAΔnagB/pCOLADuet-BCA-ST/pACYCDuet-PPK-PPK-CMK；

SL8菌株：BL21?star(DE3)ΔlacZΔnanETKAΔnagB/pCOLADuet-BCA-ST/pACYCDuet-PPK-CMK-CMK；

SL9菌株：BL21?star(DE3)ΔlacZΔnanETKAΔnagBΔ/pCOLADuet-BCA-ST/pACYCDuet-pyrG-PPK-CMK；

SL4菌株是在BL21star(DE3)細(xì)胞中，敲除lacZ基因、nanE基因、nanT基因、nanK基因、nanA基因和nagB基因，并以pACYCDuet-2為載體串聯(lián)過(guò)表達(dá)一個(gè)cmk基因和一個(gè)ppk基因，以pCOLADuet-1為載體過(guò)表達(dá)neuB基因、neuC基因、neuA基因和α-2,3唾液酸轉(zhuǎn)移酶基因；

SL7菌株是在BL21star(DE3)細(xì)胞中，敲除lacZ基因、nanE基因、nanT基因、nanK基因、nanA基因和nagB基因，并以pACYCDuet-2為載體串聯(lián)過(guò)表達(dá)一個(gè)cmk基因和兩個(gè)ppk基因，以pCOLADuet-1為載體過(guò)表達(dá)neuB基因、neuC基因、neuA基因和α-2,3唾液酸轉(zhuǎn)移酶基因；

SL8菌株是在BL21star(DE3)細(xì)胞中，敲除lacZ基因、nanE基因、nanT基因、nanK基因、nanA基因和nagB基因，并以pACYCDuet-2為載體串聯(lián)過(guò)表達(dá)兩個(gè)cmk基因和一個(gè)ppk基因，以pCOLADuet-1為載體過(guò)表達(dá)neuB基因、neuC基因、neuA基因和α-2,3唾液酸轉(zhuǎn)移酶基因；

SL9菌株是在BL21star(DE3)細(xì)胞中，敲除lacZ基因、nanE基因、nanT基因、nanK基因、nanA基因和nagB基因，并以pACYCDuet-2為載體串聯(lián)過(guò)表達(dá)一個(gè)cmk基因、一個(gè)ppk基因和一個(gè)pyrG基因，以pCOLADuet-1為載體過(guò)表達(dá)neuB基因、neuC基因、neuA基因和α-2,3唾液酸轉(zhuǎn)移酶基因。

2.如權(quán)利要求1所述的重組宿主菌的構(gòu)建方法，包括以下步驟：

S1.在宿主菌中消除基因nanE、基因nanT、基因nanK、基因nanA、基因lacZ、和基因nagB的活性；

S2.在宿主菌中過(guò)表達(dá)pyrG基因和/或過(guò)表達(dá)cmk基因和ppk基因。

3.如權(quán)利要求2所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述基因nanE、nanT、nanK、nanA的敲除和鑒定引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1-?SEQ?ID?NO.4所示，所述基因lacZ的敲除和鑒定引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.9-?SEQ?ID?NO.12所示。

4.如權(quán)利要求2所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述基因nagB的敲除和鑒定引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.5-?SEQ?ID?NO.8所示。

5.如權(quán)利要求2所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述宿主菌為含有T7?RNA聚合酶的大腸桿菌。