[發(fā)明專利]一種西酞普蘭抗原及西酞普蘭膠體金檢測(cè)試紙

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110433083.3
• 申請(qǐng)日: 2021-04-21
• 公開（公告）號(hào): CN113105538B
• 公開（公告）日: 2022-06-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐萌萌;付余;劉成;王海劍;陸維克
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州奧泰生物技術(shù)股份有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/765
• 分類號(hào): C07K14/765;C07K14/77;C07K1/107;G01N33/558;G01N33/58;G01N33/577;C07K16/44
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務(wù)所有限公司 33109
• 代理人: 尉偉敏;李博

1.一種西酞普蘭抗原，其特征在于，所述西酞普蘭抗原為西酞普蘭免疫原或西酞普蘭包被原；其中：所述西酞普蘭免疫原由西酞普蘭半抗原經(jīng)活潑酯法偶聯(lián)到牛血清蛋白上，然后純化制備得到；所述西酞普蘭包被原由西酞普蘭半抗原經(jīng)活潑酯法偶聯(lián)到卵白蛋白上，然后純化制備得到；

所述西酞普蘭半抗原的結(jié)構(gòu)式如下所示：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的西酞普蘭抗原，其特征在于，所述西酞普蘭半抗原經(jīng)以下過程制成：將西酞普蘭和氯甲酸-2，2，2-三氯乙酯按照摩爾比1∶1.5～2.0溶解到有機(jī)溶劑中，溶質(zhì)質(zhì)量與有機(jī)溶劑體積比為0.6g～0.8g∶5ml，回流反應(yīng)5h～8h后層析分離，然后蒸發(fā)去除溶劑得到西酞普蘭半抗原。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的西酞普蘭抗原，其特征在于，所述活潑酯法過程為：將西酞普蘭半抗原、DCC、NHS按照摩爾比1∶1～1.2∶1.1～1.3混合后20～30℃下攪拌16～19h反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后取上清液滴加到4～8mg/ml的牛血清蛋白溶液或卵白蛋白溶液中，上清液與蛋白溶液體積比為1∶4～6，然后3～5℃下靜置過夜，經(jīng)透析、離心取上清液即可。

4.一種西酞普蘭膠體金檢測(cè)試紙，其特征在于，所述西酞普蘭膠體金檢測(cè)試紙的檢測(cè)線以權(quán)利要求1至3任一所述的西酞普蘭抗原為標(biāo)記物，所述膠體金檢測(cè)試紙的質(zhì)控線以羊鼠抗IgG為標(biāo)記物，所述西酞普蘭檢測(cè)試紙的金標(biāo)墊由西酞普蘭單克隆抗體-膠體金復(fù)合物噴涂在結(jié)合墊上制備得到。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的西酞普蘭膠體金檢測(cè)試紙，其特征在于，所述西酞普蘭單克隆抗體由以下過程制成：將純化的西酞普蘭免疫原經(jīng)磷酸鹽緩沖液稀釋至1～1.2mg/mL，與免疫佐劑按體積比1∶1～1.2混合，然后在兔皮下和后大腿肌肉處注射，每隔2～3周反復(fù)免疫，分離血清用間接ELISA法檢測(cè)血清中抗體效價(jià)，待達(dá)到抗體效價(jià)＜1∶128后，采集血清純化制得多克隆抗體；然后利用免疫的小鼠脾臟B細(xì)胞與瘤細(xì)胞融合，通過單克隆細(xì)胞技術(shù)進(jìn)行篩選，并收集腹水進(jìn)行單克隆抗體的分離純化得到西酞普蘭單克隆抗體。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的西酞普蘭膠體金檢測(cè)試紙，其特征在于，西酞普蘭單克隆抗體-膠體金復(fù)合物經(jīng)以下過程制成：調(diào)節(jié)膠體金溶液pH值為9.0～9.2，加入最佳標(biāo)記量的西酞普蘭單克隆抗體溶液，攪拌后加入1％PEG2000緩沖液，10000～100000g離心30～60min，去沉淀用含PEG2000緩沖液重懸，重復(fù)2～3次得到膠體金標(biāo)記蛋白，然后凝膠過濾法對(duì)膠體金標(biāo)記蛋白進(jìn)行純化，以含有牛血清蛋白、疊氮化鈉的磷酸鹽緩沖液洗脫，收集得到西酞普蘭單克隆抗體-膠體金復(fù)合物。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的西酞普蘭膠體金檢測(cè)試紙，其特征在于，所述金標(biāo)墊經(jīng)以下過程制成：將西酞普蘭單克隆抗體-膠體金復(fù)合物稀釋在含牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液中，以1μl/cm的噴量均勻噴灑在結(jié)合墊上，得到金標(biāo)墊。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的西酞普蘭膠體金檢測(cè)試紙，其特征在于，金標(biāo)墊制備時(shí)還包括向含牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液中加入50～60mg/ml海藻糖和200～250mg/ml蔗糖。

9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的西酞普蘭膠體金檢測(cè)試紙，其特征在于，所述質(zhì)控線和檢測(cè)線經(jīng)以下過程制成：將羊抗鼠IgG和西酞普蘭抗原分別用磷酸鹽緩沖液稀釋至1.0mg/ml后，再以1.0μl/cm的噴量噴點(diǎn)在硝酸纖維素膜上，作為質(zhì)控線和檢測(cè)線。