[發明專利]用于促進iPSC分化為胰島素分泌細胞的混合物及其制備方法

有效

• 申請號: 202110430287.1
• 申請日: 2021-04-21
• 公開（公告）號: CN113174363B
• 公開（公告）日: 2023-05-30
• 發明（設計）人: 李洋;張怡;蘆慧穎;李婷婷;劉艷青
• 申請（專利權）人: 天晴干細胞股份有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N5/074;C12N5/0775
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 李紅媛

1.用于促進iPSC分化為胰島素分泌細胞的混合物的制備方法，其特征在于該制備方法按照以下步驟實現：

一、培養第20-30代誘導性多能干細胞融合至45％～55％時，更換完全培養基繼續培養，收集培養上清液，得到iPSC上清液；

二、將PEG8000溶于無菌PBS中配制成溶液，消毒后得到PEG8000貯存液，向iPSC上清液中加入PEG8000貯存液，充分混勻后靜置、離心，吸除上清液，沉降得到iPSC外泌體；

三、復蘇第3-4代臍帶間充質干細胞，用完全培養基重懸細胞，然后加入iPSC外泌體，混勻后轉移至培養瓶中，培養得到MSC上清液；

四、對步驟三得到的MSC上清液和iPSC上清液分別進行超濾、離心處理，分別得到MSC外泌體和iPSC外泌體；

五、將MSC外泌體和iPSC外泌體混合，得到用于促進iPSC分化為胰島素分泌細胞的混合物。

2.根據權利要求1所述的用于促進iPSC分化為胰島素分泌細胞的混合物的制備方法，其特征在于步驟一所述的完全培養基為92vol％ncEpicBasalMedium+8vol％ncEpicSupplement。

3.根據權利要求1所述的用于促進iPSC分化為胰島素分泌細胞的混合物的制備方法，其特征在于步驟一中更換完全培養基繼續培養48小時。

4.根據權利要求1所述的用于促進iPSC分化為胰島素分泌細胞的混合物的制備方法，其特征在于步驟二中PEG8000貯存液的質量濃度為50％。

5.根據權利要求1所述的用于促進iPSC分化為胰島素分泌細胞的混合物的制備方法，其特征在于步驟二中所述的靜置是在4℃下靜置90min。

6.根據權利要求1所述的用于促進iPSC分化為胰島素分泌細胞的混合物的制備方法，其特征在于步驟二中所述的離心是以1500×g離心30min。

7.根據權利要求1所述的用于促進iPSC分化為胰島素分泌細胞的混合物的制備方法，其特征在于步驟三中iPSC外泌體的加入量按照每ml完全培養基加入20μg的iPSC外泌體。

8.根據權利要求1所述的用于促進iPSC分化為胰島素分泌細胞的混合物的制備方法，其特征在于步驟三中是在37℃培養箱中培養72小時。

9.根據權利要求1所述的用于促進iPSC分化為胰島素分泌細胞的混合物的制備方法，其特征在于步驟四中采用40μm細胞篩過濾。

10.用于促進iPSC分化為胰島素分泌細胞的混合物，其特征在于該用于促進iPSC分化為胰島素分泌細胞的混合物是由體積比為(1～2)：(1～2)的iPSC外泌體和臍帶間充質干細胞外泌體的混合物。