[發明專利]一種新型高溫Argonaute蛋白的表征及應用有效
| 申請號： | 202110425455.8 | 申請日： | 2021-04-20 |
| 公開（公告）號： | CN113106087B | 公開（公告）日： | 2023-02-24 |
| 發明（設計）人： | 馮雁;孫瑩瓔;郭翔;陸慧;李忠磊 | 申請（專利權）人： | 上海交通大學 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10;C12Q1/6806;C12Q1/6851;C12N15/70;C12N15/55;C12N9/22 |
| 代理公司： | 上海一平知識產權代理有限公司 31266 | 代理人： | 張璐;徐迅 |
| 地址： | 200240 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 新型 高溫 argonaute 蛋白 表征 應用 | ||
1.一種核酸切割體系，其特征在于，所述核酸切割體系包括：
(a) 向導DNA(gDNA)，所述的向導DNA是5’端磷酸化的單鏈DNA分子；
(b) 可編程核酸內切酶Argonaute (Ago)，所述的可編程核酸內切酶Argonaute來源于嗜熱菌(
(c) 報告核酸，其中若所述報告核酸被剪切，所述的剪切是可以被檢測出的。
2.如權利要求1所述的核酸切割體系，其特征在于，所述核酸切割體系的溫度為80-99.9℃。
3.如權利要求1所述的核酸切割體系，其特征在于，所述核酸切割體系的溫度為90-99.9℃。
4.如權利要求1所述的核酸切割體系，其特征在于，所述的
5.如權利要求1所述的核酸切割體系，其特征在于，所述的向導DNA與所述報告核酸之間具有反向互補的片段。
6.如權利要求1所述的核酸切割體系，其特征在于，所述的向導DNA的長度為5-30nt。
7.如權利要求6所述的核酸切割體系，其特征在于，所述的向導DNA的長度為15-21nt。
8.如權利要求1所述的核酸切割體系，其特征在于，所述核酸內切酶Argonaute能夠在結合于gDNA的5’端起第10-11位的報告核酸的位點處進行剪切。
9.如權利要求1所述的核酸切割體系，其特征在于，當所述報告核酸被剪切，所述的剪切能夠通過電泳法被檢測出。
10.如權利要求1所述的核酸切割體系，其特征在于，所述報告核酸是熒光報告核酸，所述熒光報告核酸帶有熒光基團和/或淬滅基團。
11.一種富集低豐度目標核酸的反應體系，其特征在于，所述反應體系用于對一核酸樣本同時進行聚合酶鏈式反應(PCR)和核酸切割反應，從而獲得擴增-切割反應產物；
其中，所述的核酸樣本含有第一核酸和第二核酸，其中，所述的第一核酸為所述目標核酸，而所述的第二核酸為非目標核酸；
所述的核酸切割反應用于特異性切割非目標核酸，但不切割所述目的核酸；
所述的擴增-切割反應體系含有(i)進行PCR反應所需的試劑和(ii)如權利要求1所述的核酸切割體系。
12.如權利要求11所述的反應體系，其特征在于，所述gDNA包括正向gDNA和反向gDNA；
其中，所述正向gDNA是指與目標核酸具有相同序列片段的gDNA，所述反向gDNA是指與目標核酸具有反向互補序列片段的gDNA。
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