[發(fā)明專利]一種酶法改性聯(lián)合反相柱色譜分離制備高純度二亞油酰磷脂酰膽堿的方法和其產(chǎn)物

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110423929.5
• 申請(qǐng)日: 2021-04-20
• 公開（公告）號(hào): CN113174412B
• 公開（公告）日: 2022-12-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 從艷霞;張維農(nóng);齊玉堂;劉思敏;張海龍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢輕工大學(xué)
• 主分類號(hào): C12P7/6458
• 分類號(hào): C12P7/6458;C12P7/6481;C12P7/6472;C12P13/00;C07F9/10
• 代理公司: 北京思創(chuàng)大成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11614
• 代理人: 趙爽

1.一種酶法改性聯(lián)合反相柱色譜分離制備高純度二亞油酰磷脂酰膽堿的方法，其特征在于，該方法包括：

(i)對(duì)高純度磷脂酰膽堿、亞油酸、來(lái)源于疏棉狀嗜熱絲孢菌的TLIM脂肪酶、正己烷和水的混合體系采用超聲波連續(xù)流細(xì)胞破碎儀進(jìn)行預(yù)混，混合物在脂肪酶的催化作用下實(shí)現(xiàn)磷脂酰膽堿上酰基與亞油酸的酯交換，得到酶法改性磷脂；

步驟(i)中，脂肪酶改性磷脂的反應(yīng)在50～70℃的溫度下進(jìn)行，改性反應(yīng)的時(shí)間為0.5～24h；

步驟(i)中，采用超聲波連續(xù)流細(xì)胞破碎儀進(jìn)行預(yù)混的條件包括：

功率為500～800W，時(shí)間為10～300s；

(ii)丙酮洗脫除去酶法改性磷脂中的游離脂肪酸，得到富含二亞油酰磷脂酰膽堿的丙酮不溶物；

(iii)富含二亞油酰磷脂酰膽堿的丙酮不溶物在以C18為固定相的色譜柱上，經(jīng)洗脫劑洗脫，再經(jīng)分離純化得到高純度二亞油酰磷脂酰膽堿；

C18固定相的粒徑為20～35μm，孔徑為

富含二亞油酰磷脂酰膽堿的丙酮不溶物與C18的質(zhì)量比為0.1:1～10:1；所述洗脫劑的流速為0.1～0.6bv/min；

所述高純度磷脂酰膽堿的純度≥90wt％。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，步驟(i)中，

所述高純度磷脂酰膽堿與所述亞油酸的質(zhì)量比為1:1～1:10；

相對(duì)于高純度磷脂酰膽堿和亞油酸的總質(zhì)量，水的含量為0.5～10wt％，脂肪酶的含量為1～20wt％；

所述高純度磷脂酰膽堿的純度≥90wt％。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，步驟(i)中，

所述高純度磷脂酰膽堿中二亞油酰磷脂酰膽堿的含量為28～36wt％。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，步驟(iii)中，

所述洗脫劑為低碳醇或低碳醇水溶液，所述洗脫劑中低碳醇與水的體積比為1:0～1:1；

所述低碳醇選自甲醇、乙醇和異丙醇中的至少一種。