[發明專利]一種酶法改性聯合反相柱色譜分離制備高純度二亞油酰磷脂酰膽堿的方法和其產物

有效

• 申請號: 202110423929.5
• 申請日: 2021-04-20
• 公開（公告）號: CN113174412B
• 公開（公告）日: 2022-12-02
• 發明（設計）人: 從艷霞;張維農;齊玉堂;劉思敏;張海龍
• 申請（專利權）人: 武漢輕工大學
• 主分類號: C12P7/6458
• 分類號: C12P7/6458;C12P7/6481;C12P7/6472;C12P13/00;C07F9/10
• 代理公司: 北京思創大成知識產權代理有限公司 11614
• 代理人: 趙爽

1.一種酶法改性聯合反相柱色譜分離制備高純度二亞油酰磷脂酰膽堿的方法，其特征在于，該方法包括：

(i)對高純度磷脂酰膽堿、亞油酸、來源于疏棉狀嗜熱絲孢菌的TLIM脂肪酶、正己烷和水的混合體系采用超聲波連續流細胞破碎儀進行預混，混合物在脂肪酶的催化作用下實現磷脂酰膽堿上酰基與亞油酸的酯交換，得到酶法改性磷脂；

步驟(i)中，脂肪酶改性磷脂的反應在50～70℃的溫度下進行，改性反應的時間為0.5～24h；

步驟(i)中，采用超聲波連續流細胞破碎儀進行預混的條件包括：

功率為500～800W，時間為10～300s；

(ii)丙酮洗脫除去酶法改性磷脂中的游離脂肪酸，得到富含二亞油酰磷脂酰膽堿的丙酮不溶物；

(iii)富含二亞油酰磷脂酰膽堿的丙酮不溶物在以C18為固定相的色譜柱上，經洗脫劑洗脫，再經分離純化得到高純度二亞油酰磷脂酰膽堿；

C18固定相的粒徑為20～35μm，孔徑為

富含二亞油酰磷脂酰膽堿的丙酮不溶物與C18的質量比為0.1:1～10:1；所述洗脫劑的流速為0.1～0.6bv/min；

所述高純度磷脂酰膽堿的純度≥90wt％。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，步驟(i)中，

所述高純度磷脂酰膽堿與所述亞油酸的質量比為1:1～1:10；

相對于高純度磷脂酰膽堿和亞油酸的總質量，水的含量為0.5～10wt％，脂肪酶的含量為1～20wt％；

所述高純度磷脂酰膽堿的純度≥90wt％。

3.根據權利要求1所述的方法，其中，步驟(i)中，

所述高純度磷脂酰膽堿中二亞油酰磷脂酰膽堿的含量為28～36wt％。

4.根據權利要求1所述的方法，其中，步驟(iii)中，

所述洗脫劑為低碳醇或低碳醇水溶液，所述洗脫劑中低碳醇與水的體積比為1:0～1:1；

所述低碳醇選自甲醇、乙醇和異丙醇中的至少一種。