[發明專利]一種同時檢測氧化三甲胺和苯乙酰谷氨酰胺的方法及其檢測試劑盒和應用

在審

• 申請號: 202110419114.X
• 申請日: 2021-04-19
• 公開（公告）號: CN113176364A
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發明（設計）人: 禹松林;邱玲;唐月明;王丹晨
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院北京協和醫院
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 商秀玲

本發明涉及分析檢測技術領域，具體涉及一種同時檢測氧化三甲胺和苯乙酰谷氨酰胺的方法及其檢測試劑盒和應用。本發明提供的檢測方法為將待測樣品進行樣品前處理，再采用液相色譜串聯質譜法進行檢測，所述樣品前處理包括：將所述待測樣品采用沉淀劑進行沉淀處理，獲得分離的上清液，所述沉淀劑為含有10?100mM乙酸銨的乙腈和甲醇混合溶液。該方法留取樣本簡便，樣品處理簡單，用樣量少，檢測速度快，可減少因分別測定需要兩次留樣、費時、增加成本等問題，易于推廣應用；該檢測方法具有較高的精密度和較低的基質效應，能夠顯著提高氧化三甲胺和苯乙酰谷氨酰胺檢測的準確性。

技術領域

本發明涉及分析檢測技術領域，具體涉及一種同時檢測氧化三甲胺和苯乙酰谷氨酰胺的方法及其檢測試劑盒和應用。

背景技術

氧化三甲胺(trimethylamine-N-oxide,TMAO)和苯乙酰谷氨酰胺(phenylacetylglutamine,PAGln)是腸道微生物的代謝產物，TMAO是由腸道微生物分解營養素產生的三甲胺在肝臟黃素單加氧酶催化下氧化生成的代謝物，PAGln是腸道中未被吸收的苯丙氨酸經微生物代謝成為苯乙酸后在肝臟中代謝生成的產物。

目前僅有對血液或尿液中TMAO測定的質譜方法(Wang Z,et al,Measurement oftrimethylamine-N-oxide by stable isotope dilution liquid chromatographytandem mass spectrometry,Anal Biochem,2014,455:35-40；Qiu W,et al,A faster andsimpler UPLC-MS/MS method for the simultaneous determination oftrimethylamine N-oxide,trimethylamine and dimethylamine in different types ofbiological samples,Food Funct,2019,10,6484-6491)，或者對血液及尿液中PAGln測定的質譜方法(Laryea MD,et al,Simultaneous LC-MS/MS determination ofphenylbutyrate,phenylacetate benzoate and their corresponding metabolitesphenylacetylglutamine and hippurate in blood and urine.J Inherit MetabDis.2010Dec；33Suppl 3:S321-8.)，但尚沒有將TMAO和PAGln同時檢測的方法。而這兩種指標均為腸道微生物群代謝產物，同時測定具有減少樣品用量、經濟快捷、減少工作量以及成本等優勢。

發明內容

本發明的目的是提供一種同時檢測氧化三甲胺和苯乙酰谷氨酰胺的方法，該方法能夠實現氧化三甲胺和苯乙酰谷氨酰的同時有效檢測。本發明的另一目的是提供基于該方法的檢測試劑盒及其應用。

具體地，本發明提供以下技術方案：

第一方面，本發明提供一種同時檢測氧化三甲胺和苯乙酰谷氨酰胺的方法，其為：將待測樣品進行樣品前處理，再采用液相色譜串聯質譜法進行檢測，其中，所述樣品前處理包括：將所述待測樣品采用沉淀劑進行沉淀處理，獲得分離的上清液，所述沉淀劑為含有10-100mM乙酸銨的乙腈和甲醇混合溶液。

優選地，所述沉淀劑中，乙腈和甲醇的體積比為(80-90)：(10-20)。

進一步優選地，所述沉淀劑中乙酸銨的濃度為10-30mM。