[發(fā)明專利]一種同時檢測氧化三甲胺和苯乙酰谷氨酰胺的方法及其檢測試劑盒和應(yīng)用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110419114.X | 申請日： | 2021-04-19 |
| 公開（公告）號： | CN113176364A | 公開（公告）日： | 2021-07-27 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 禹松林;邱玲;唐月明;王丹晨 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院 |
| 主分類號： | G01N30/06 | 分類號： | G01N30/06;G01N30/88 |
| 代理公司： | 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002 | 代理人： | 商秀玲 |
| 地址： | 100730*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 同時 檢測 氧化 三甲胺 乙酰 谷氨酰胺 方法 及其 試劑盒 應(yīng)用 | ||
1.一種同時檢測氧化三甲胺和苯乙酰谷氨酰胺的方法，其特征在于，將待測樣品進行樣品前處理，再采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法進行檢測，
所述樣品前處理包括：將所述待測樣品采用沉淀劑進行沉淀處理，獲得分離的上清液，
所述沉淀劑為含有10-100mM乙酸銨的乙腈和甲醇混合溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時檢測氧化三甲胺和苯乙酰谷氨酰胺的方法，其特征在于，所述沉淀劑中，乙腈和甲醇的體積比為(80-90)：(10-20)；
優(yōu)選地，所述沉淀劑的用量為使得沉淀處理體系中，乙酸銨的濃度為10-20mM，甲醇和乙腈的體積百分含量分別為50-60％和5-15％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的同時檢測氧化三甲胺和苯乙酰谷氨酰胺的方法，其特征在于，在所述沉淀處理前，將所述待測樣品與氧化三甲胺和苯乙酰谷氨酰胺的同位素內(nèi)標混合；
優(yōu)選地，所述氧化三甲胺的同位素內(nèi)標的濃度為0.001-0.01μg/ml，所述苯乙酰谷氨酰胺的同位素內(nèi)標的濃度為0.1-5μg/ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求1～3任一項所述的同時檢測氧化三甲胺和苯乙酰谷氨酰胺的方法，其特征在于，所述檢測中，液相色譜的流動相包括流動相A和流動相B，所述流動相A為含有0.01-0.1％甲酸和1-10mM甲酸銨的水溶液，所述流動相B為乙腈，或者為含有1-10mM甲酸銨的乙腈或80-99％的乙腈水溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的同時檢測氧化三甲胺和苯乙酰谷氨酰胺的方法，其特征在于，所述流動相按照以下梯度進行梯度洗脫：0-0.5min，流動相A 15％，0.5-1.4min，流動相A15-45％，1.4-3.5min，流動相A 45％，3.5-4.0min，流動相A 45-15％，4.0-5.0min，流動相A15％。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的同時檢測氧化三甲胺和苯乙酰谷氨酰胺的方法，其特征在于，梯度洗脫過程中，所述流動相的流速為0.3-0.5mL/min。
7.根據(jù)權(quán)利要求1～6任一項所述的同時檢測氧化三甲胺和苯乙酰谷氨酰胺的方法，其特征在于，質(zhì)譜檢測條件如下：多離子監(jiān)測反應(yīng)模式，正離子模式，電噴霧電離，離子源溫度400～600℃，GS1為20～70psi，GS2為20～70psi，監(jiān)測的離子對信息如下：TMAO定量：m/z75.9→58.0，TMAO定性：m/z 75.9→59.1，TMAO-D9：m/z 85.1→68.2，PAGln定量：m/z 265.2→130.2，PAGln定性：m/z 265.2→84.1，PAGln-D5：m/z 270.2→147.3。
8.一種氧化三甲胺和苯乙酰谷氨酰胺液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測用樣品前處理沉淀劑，其特征在于，所述沉淀劑為含有10-100mM乙酸銨的乙腈和甲醇混合溶液，
所述沉淀劑中，乙腈和甲醇的體積比為(80-90)：(10-20)。
9.一種同時檢測氧化三甲胺和苯乙酰谷氨酰胺的試劑盒，其特征在于，包括：
試劑I：含有10-100mM乙酸銨的乙腈和甲醇混合溶液，乙腈和甲醇的體積比為(80-90)：(10-20)，用于樣品前處理；
試劑II：含有0.01-0.1％甲酸和1-10mM甲酸銨的水溶液，用于作為液相色譜分離的流動相A；
試劑III：乙腈，或者為含有1-10mM甲酸銨的乙腈或80-99％的乙腈水溶液，用于作為液相色譜分離的流動相B；
優(yōu)選地，所述試劑盒還包括：
試劑IV：氧化三甲胺和苯乙酰谷氨酰胺的同位素內(nèi)標，氧化三甲胺的同位素內(nèi)標的濃度為0.001-0.01μg/ml，苯乙酰谷氨酰胺的同位素內(nèi)標的濃度為0.1-5μg/ml；
試劑V：氧化三甲胺和苯乙酰谷氨酰胺的標準品溶液。
10.權(quán)利要求8所述的沉淀劑或權(quán)利要求9所述的試劑盒在氧化三甲胺和苯乙酰谷氨酰胺檢測中的應(yīng)用。
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