[發明專利]T-ALL耐藥模型的構建及應用

有效

• 申請號: 202110418260.0
• 申請日: 2021-04-19
• 公開（公告）號: CN112961858B
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 劉韜;陳雪梅
• 申請（專利權）人: 深圳市羅湖區人民醫院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N9/22;C12N5/10
• 代理公司: 華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 潘艷麗

本發明公開了一種MAEL基因的特異性敲降試劑在制備逆轉T?ALL耐藥性癥狀的藥物中的應用。本發明還公開了一種細胞，所述細胞源自T?ALL生物體，所述細胞在編碼MAEL的靶DNA序列中包含破壞，所述破壞使得MAEL基因的表達量下降。

技術領域

本發明涉及耐藥性技術領域，特別是涉及T-ALL耐藥模型的構建及應用。

背景技術

急性淋巴細胞白血病(ALL)是一種常見的血液系統惡性腫瘤，由造血干細胞的異常增殖和分化引起。T細胞急性淋巴細胞白血病(T-ALL)是由T細胞前體的基因改變引起的，導致胸腺、血液、骨髓和外周組織中T細胞的發育停滯和聚集。多年來，轉錄因子表達失調、CDKN2A/2B細胞周期調節因子的損傷和NOTCH1信號的過度激活在T-ALL的發病機制中起著重要作用。盡管T-ALL的診斷和治療已經取得了很大的進展，但耐藥、復發等難治性T-ALL的治療仍然是臨床亟待解決的問題，因此構建合適的T-ALL研究模型和耐藥研究對于T-ALL的臨床研究具有重要的作用。

發明內容

基于此，有必要針對T-ALL耐藥的問題，提供一種T-ALL耐藥模型的構建及應用。

MAEL基因的特異性敲降試劑在制備逆轉T-ALL耐藥性癥狀的藥物中的應用。

在其中一些實施例中，所述特異性敲降試劑用以執行以下任意一種方法：CRISPR/Cas9、鋅指核酸酶、TALEN、MegaTAL、大范圍核酸酶、Cpf1、同源重組、RNAi。

在其中一些實施例中，所述特異性敲降試劑包括引物或探針。

在其中一些實施例中，所述特異性敲降試劑選自以下siRNA對中的至少一種：(SEQID NO:25，SEQ ID NO:26)；(SEQ ID NO:27，SEQ ID NO:28)；(SEQ ID NO:29，SEQ ID NO:30)。

在其中一些實施例中，所述T-ALL耐藥性癥狀所耐藥的種類為γ-分泌酶抑制劑。

一種細胞，所述細胞源自T-ALL生物體，所述細胞在編碼MAEL的靶DNA序列中包含破壞，所述破壞使得MAEL基因的表達量下降。

在其中一些實施例中，所述破壞是插入突變、錯義突變、移碼突變或缺失突變。

在其中一些實施例中，所述破壞使得所述細胞的MRP基因的表達量下降。

在其中一些實施例中，所述破壞使得所述細胞的LRP基因的表達量下降。

在其中一些實施例中，所述細胞為T-ALL體細胞通過基因重排而獲得的誘導多能干細胞。

本發明首次發現MAEL基因的高表達與T-ALL的耐藥直接相關，通過MAEL基因敲降，可逆轉T-ALL的多藥耐藥。

附圖說明

圖1為本發明一實施例的PBMC細胞重編程為iPSC過程的顯微拍攝圖(40×)；

圖2為本發明一實施例的iPSC克隆傳代10次后的顯微拍攝圖(40×)；

圖3為本發明一實施例的iPSC克隆的堿性磷酸酶染色結果(40×)；

圖4為本發明一實施例的iPSC四種多能性標志蛋白的免疫熒光染色圖；

圖5為本發明一實施例的畸胎瘤的三胚層HE染色圖；

圖6為本發明一實施例的Notch1突變的基因組測序圖，其中，H-iPS為健康人PBMC來源的iPS細胞，W10-iPS為T-ALL來源的iPS細胞；

圖7為本發明一實施例的LY411575藥物處理W10-iPS的IC50曲線圖；