[發明專利]甜瓜抗落蒂基因CmAL3緊密連鎖的分子標記SNP-392及其應用

有效

• 申請號: 202110413166.6
• 申請日: 2021-04-16
• 公開（公告）號: CN113005221B
• 公開（公告）日: 2023-01-06
• 發明（設計）人: 盛云燕;戴冬洋;王嶺;李丹丹;張帆;張君鳴;張佳欣;王迪
• 申請（專利權）人: 黑龍江八一農墾大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 哈爾濱龍科專利代理有限公司 23206
• 代理人: 王新雨

1.甜瓜抗落蒂基因CmAL3緊密連鎖的分子標記SNP-392的引物，其特征在于：所述分子標記SNP-392的引物序列為：

SNP-392F：TGCATAATACTCATTCAACGCA，

SNP-392R：TTGATGCTTACTTTGGTGATGC。

2.權利要求1所述的分子標記SNP-392的引物在鑒定甜瓜抗落蒂基因CmAL3中的應用。

3.根據權利要求2所述的分子標記SNP-392的引物在鑒定甜瓜抗落蒂基因CmAL3中的應用，其特征在于：所述應用具體為：

（1）提取待測樣品的DNA，采用分子標記SNP-392的引物進行PCR擴增；

（2）PCR反應產物用于AluI酶切反應，酶切反應在37℃水浴鍋中溫浴20min，加入4μL 6× loading buffer后于6%聚丙烯酰胺電泳，125V電壓電泳60min，在Tanon2500凝膠成像儀進行拍照；

（3）待測DNA樣品經過PCR擴增和AluI酶切后，電泳方式檢測，266bp片段為含有抗落蒂基因CmAL3甜瓜材料，244bp片段為不含有抗落蒂基因CmAL3，表型為易落蒂甜瓜材料。

4.根據權利要求3所述的分子標記SNP-392的引物在鑒定甜瓜抗落蒂基因CmAL3中的應用，其特征在于：步驟（1）中，PCR反應體系為：30ng/μL DNA 2μL，SNP-392引物上下游各0.2μL，10×PCR buffer 1μL，2.5mM dNTP 0.3μL，Taq酶0.1μL，ddH₂O 6.4μL。

5.根據權利要求3所述的分子標記SNP-392的引物在鑒定甜瓜抗落蒂基因CmAL3中的應用，其特征在于：步驟（1）中，PCR擴增條件為：94℃預變性2min、94℃變性20Sec、68℃退火1min、72℃延伸30Sec，共6個循環，每個循環溫度降低2℃；94℃變性20Sec、58℃退火1 min、72℃延伸30Sec，共6個循環，每個循環溫度降低1℃；94℃變性20Sec、50℃退火30Sec、72℃延伸30Sec，共20個循環，最后72℃延伸5min。

6.根據權利要求3所述的分子標記SNP-392的引物在鑒定甜瓜抗落蒂基因CmAL3中的應用，其特征在于：步驟（2）中，酶切體系為10 μL：PCR產物5.0 μL、無菌水3.4 μL、內切酶AluI0.6 μL 和 10× NEB Buffer 1.0 μL。

7.權利要求1所述的分子標記SNP-392的引物用于甜瓜抗蒂落分子標記輔助育種。