[發明專利]甜瓜抗落蒂基因CmAL3緊密連鎖的分子標記SNP-392及其應用

有效

• 申請號: 202110413166.6
• 申請日: 2021-04-16
• 公開（公告）號: CN113005221B
• 公開（公告）日: 2023-01-06
• 發明（設計）人: 盛云燕;戴冬洋;王嶺;李丹丹;張帆;張君鳴;張佳欣;王迪
• 申請（專利權）人: 黑龍江八一農墾大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 哈爾濱龍科專利代理有限公司 23206
• 代理人: 王新雨

甜瓜抗落蒂基因CmAL3緊密連鎖的分子標記SNP?392及其應用，屬于植物分子遺傳育種研究領域。所述分子標記SNP?392的引物序列為：SNP?392F：TGCATAATACTCATTCAACGCA，SNP?392R：TTGATGCTTACTTTGGTGATGC。通過利用本發明提供的特異性引物對采用PCR方法檢測待測甜瓜的基因組DNA，擴增CAPs分子標記SNP?392，限制性內切酶AluI酶切后，甜瓜含有抗落蒂CmAL3基因在266bp產生擴增產物，而不含有抗落蒂基因CmAL3擴增條帶經限制性內切酶Alu I酶切后，在244bp產生酶切產物，通過此分子標記可以準確對甜瓜進行抗落蒂基因CmAL3的篩選，用于篩選植株，大大提升了甜瓜的育種效率。

技術領域

本發明屬于植物分子遺傳育種研究領域，具體涉及甜瓜抗落蒂基因CmAL3緊密連鎖的分子標記SNP-392及其應用。

背景技術

甜瓜(Cucumis melo.L)為世界栽培的重要經濟作物，具有經濟價值高、營養豐富等特點，在我國種植范圍較廣。近年來，甜瓜產業在部分地區已成為農民脫貧增收的支柱性產業，在鄉村振興中發揮著重要作用。雖然我國甜瓜產業取得了顯著發展，但采收前的果實脫落(落蒂)現象仍會嚴重影響甜瓜產量，造成瓜農經濟損失。落蒂為果實成熟的重要性狀之一，受環境等多種因素的影響，在生產過程中較難通過表型鑒定其發生機制；從農業生產角度出發，果實脫落對于產量具有重大的影響，集中收獲期之前脫落，易造成產量、品質的下降，因此控制甜瓜果實落蒂有利于機械化采收，減少人力物力的投入，降低生產成本。隨著勞動力缺口逐漸增大，甜瓜采收的機械化與規?；a勢在必行，而明確調控落蒂性狀的基礎研究和控制機理成為選育抗落蒂甜瓜品種的關鍵問題。因此，克隆甜瓜抗落蒂基因CmAL3并明確其調控分子機制，為培育甜瓜抗落蒂品種提供理論支持具有重要意義。

多年來甜瓜落蒂性狀研究一直圍繞著乙烯含量相關位點挖掘分析。Pe′rin etal.(2002)利用F₂分離群體對甜瓜果實落蒂性狀及乙烯釋放含量QTL開展定位分析，結果顯示甜瓜落蒂受2對獨立遺傳基因(AL3和AL4)控制，這兩個位點分別在甜瓜第8、9號染色體，同時檢測到參與離層形成和乙烯自催化生物合成4個QTL，分布在甜瓜1、2、3和11號染色體。在此之前，Takada等(1975)也曾報道兩個與果實成熟落蒂的相關基因AL1和AL2，由于當時甜瓜基因組數據及遺傳圖譜開發的限制，未能將這四個位點進行分析，因此尚不明確他們之間的關系。2005年Eduardo等利用非呼吸躍變親本回交構建的近等基因系，鑒定了兩個參與果實呼吸躍變的QTL位點(ETHQB3.5和ETHQV6.3)；2013年，Vegas等將ETHQV6.3定位在甜瓜第6號染色體4.5Mb區間，確定候選基因為MELO3C016540(CmNAC-NOR)，該基因與番茄NOR基因同源，因此推測甜瓜和番茄果實成熟可能具有相同的機制(Ríos et al.，2017)。2020年Pe′reira等利用重組自交系對成熟相關多個性狀進行了QTL分析，共檢測到5個脫落相關的QTL位點(ABSQV)分別位于甜瓜第2，5，6，7，8號染色體，其中第8號染色體上QTL位點ABSQV8.1位于基因組9,941,727～17,287,431，同時鑒定了乙烯相關的QTL位點ethqv8.1，該QTL位點所在區域(9,941,727～17,287,431)共包含11個與果實成熟相關QTL位點，候選區域與本發明CmAL3位點候選區域(10,774,778～10,839,486)重合。雖然CmAL3候選基因與ethqv8.1位點處于相同候選區域，但是利用滲透系對ethqv8.1進行精細定位發現，目標區域脫落位點ABSQV8.1不分離，說明這兩者之間非相同基因，而ABSQV8.1與CmAL3是否為相同候選基因，目前尚不明確。

發明內容