[發明專利]一種用于分離旱獺組織中布魯氏菌的培養基及其制備方法

在審

• 申請號: 202110412885.6
• 申請日: 2021-04-16
• 公開（公告）號: CN113122453A
• 公開（公告）日: 2021-07-16
• 發明（設計）人: 薛紅梅;謝輝;李積權;馬麗;楊旭欣;吳海生;王建玲;徐立青;張愛萍;趙元博;趙志軍;于守鴻
• 申請（專利權）人: 青海省地方病預防控制所
• 主分類號: C12N1/02
• 分類號: C12N1/02;C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 青海省專利服務中心 63100
• 代理人: 周同永

本發明公開了一種用于分離旱獺組織中布魯氏菌的培養基及其制備方法。具體由瓊脂、胰蛋白月示、氯化鈉、無水亞硫酸鈉、酵母提取物、牛肝浸粉、D?葡萄糖、赤蘚糖醇、枸櫞酸鈉、特級馬血清、桿菌肽、放線菌酮及蒸餾水或雙蒸水組分構成。該培養基是一種能夠對布魯氏菌進行培養的固體培養基，營養加均衡；所添加的組分即滿足了布魯氏菌的代謝需求的碳源、氮源等，又抑制污染樣品中其他細菌的生長，提高污染樣品中布魯氏菌的檢出率；各組分之間相輔相成，達到協同增效的作用；本發明提供的培養基能夠滿足自喜馬拉雅旱獺組織中分離布魯氏菌的生長繁殖需求，具有質量穩定、制備簡便和培養菌數高的優勢。

技術領域

本發明涉及微生物技術領域，具體涉及一種用于分離旱獺組織中布魯氏菌的培養基及其制備方法。

背景技術

布魯氏菌病(簡稱布病)是一種由布魯氏菌引起的人畜共患性疾病，世界衛生組織(WHO)和世界動物衛生組織(OIE)均將其列為法定報告傳染病之一，我國將其列為乙類傳染病。布魯氏菌是一種細胞內寄生的需氧型革蘭氏陰性菌，多寄生于網狀內皮系統，可在人和動物體內存活，它的繁殖生長對營養要求較高，且生長緩慢，在37℃、pH6.6～7.4環境生長最佳。青海省布魯氏菌病病原分為三個種共六個生物型，以羊種布魯氏菌為主，在菌種與宿主中存在有轉移的現象，菌株也有變異發生。

喜馬拉雅旱獺是青藏高原特有的野生動物，主要棲息在高原高山草原、高寒草甸、灌叢草甸和高寒草原的食草類哺乳動物，生活習性是每年4月底出蜇、10月底入蜇冬眠。近幾年，國內及國內西北地區對旱獺及喜瑪拉雅旱獺進行血清樣品調查后，未分離出布魯氏菌。但是，青南地區對245份喜馬拉雅旱獺全血樣品，抗體陽性13份，分離到 1株疑似布魯氏菌。可以推斷喜馬拉雅旱獺可以感染布病，但未能從旱獺體內分離出布魯氏菌。

現有分離、培養布魯氏菌的培養基方案中，經常使用布魯氏瓊脂培養基用于培養布魯氏菌，達到使用要求。但是，這種培養基適用于無污染的樣品，對已污染和組織樣品而言分離純化布魯氏菌較困難和費時，因此，尋找一種從已污染和組織樣品中分離、純化布魯氏菌的適宜、高效的培養基，對傳統培養基和方法進行改進，是急需解決的問題。本申請人首先從喜馬拉雅旱獺組織樣品中分離布魯氏菌，現有的技術無法實現在喜馬拉雅旱獺中檢測出布病抗體陽性的同時分離出布魯氏菌，另外，在進行從喜馬拉雅旱獺組織樣品中分離布魯氏菌的實際操作中，由于樣品多有污染，其中混有其他各種病原性微生物，因此需要選擇敏感性優異的培養基用于布魯氏菌的培養和分離。

發明內容

基于上述技術問題，本發明通過選擇提供敏感性優異的培養基能夠從喜馬拉雅旱獺組織樣品中分離出布魯氏菌，同時初步分析喜馬拉雅旱獺組織樣品中分離出的疑似菌是否是布魯氏菌。目的是以喜馬拉雅旱獺為對象提供一種用于分離旱獺組織中布魯氏菌的培養基及其制備方法。

本發明保護一種用于分離旱獺組織中布魯氏菌的培養基，制備 1000mL的該培養基，具體由如下的組分構成：瓊脂13～18g；胰蛋白月示10～18g；氯化鈉4～8g；無水亞硫酸鈉0.1～0.4g；酵母提取物2～5g；牛肝浸粉5～15g；D-葡萄糖2～6g；赤蘚糖醇0.05～0.2g；枸櫞酸鈉 0.2～0.5g；特級馬血清6～10ml；桿菌肽15～25單位/ml；放線菌酮 100～200ug/ml；余量的蒸餾水或雙蒸水。

進一步的，制備1000mL的該培養基，具體由如下的組分構成：瓊脂13～15g；胰蛋白月示10～15g；氯化鈉4～5g；無水亞硫酸鈉0.1～0.2g；酵母提取物2～3g；牛肝浸粉5～10g；D-葡萄糖2～3g；赤蘚糖醇0.05～0.1g；枸櫞酸鈉0.2～0.3g；特級馬血清6～8ml；桿菌肽15～20 單位/ml；放線菌酮100～150ug/ml；余量的蒸餾水或雙蒸水。