[發(fā)明專利]一種用于分離旱獺組織中布魯氏菌的培養(yǎng)基及其制備方法

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• 申請日: 2021-04-16
• 公開（公告）號: CN113122453A
• 公開（公告）日: 2021-07-16
• 發(fā)明（設計）人: 薛紅梅;謝輝;李積權(quán);馬麗;楊旭欣;吳海生;王建玲;徐立青;張愛萍;趙元博;趙志軍;于守鴻
• 申請（專利權(quán)）人: 青海省地方病預防控制所
• 主分類號: C12N1/02
• 分類號: C12N1/02;C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 青海省專利服務中心 63100
• 代理人: 周同永

1.一種用于分離旱獺組織中布魯氏菌的培養(yǎng)基，其特征在于，制備1000mL的該培養(yǎng)基，具體由如下的組分構(gòu)成：

瓊脂13～18g；胰蛋白月示10～18g；氯化鈉4～8g；無水亞硫酸鈉0.1～0.4g；酵母提取物2～5g；牛肝浸粉5～15g；D-葡萄糖2～6g；赤蘚糖醇0.05～0.2g；枸櫞酸鈉0.2～0.5g；特級馬血清6～10ml；桿菌肽15～25單位/ml；放線菌酮100～200ug/ml；余量的蒸餾水或雙蒸水。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于分離旱獺組織中布魯氏菌的培養(yǎng)基，其特征在于，制備1000mL的該培養(yǎng)基，具體由如下的組分構(gòu)成：瓊脂13～15g；胰蛋白月示10～15g；氯化鈉4～5g；無水亞硫酸鈉0.1～0.2g；酵母提取物2～3g；牛肝浸粉5～10g；D-葡萄糖2～3g；赤蘚糖醇0.05～0.1g；枸櫞酸鈉0.2～0.3g；特級馬血清6～8ml；桿菌肽15～20單位/ml；放線菌酮100～150ug/ml；余量的蒸餾水或雙蒸水。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于分離旱獺組織中布魯氏菌的培養(yǎng)基，其特征在于，制備1000mL的該培養(yǎng)基，具體由如下的組分構(gòu)成：瓊脂15～18g；胰蛋白月示15～18g；氯化鈉5～8g；無水亞硫酸鈉0.2～0.4g；酵母提取物3～5g；牛肝浸粉10～15g；D-葡萄糖3～6g；赤蘚糖醇0.1～0.2g；枸櫞酸鈉0.3～0.5g；特級馬血清8～10ml；桿菌肽20～25單位/ml；放線菌酮150～200ug/ml；余量的蒸餾水或雙蒸水。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于分離旱獺組織中布魯氏菌的培養(yǎng)基，其特征在于，制備1000mL的該培養(yǎng)基，具體由如下的組分構(gòu)成：瓊脂13g；胰蛋白月示10g；氯化鈉5g；無水亞硫酸鈉0.1g；酵母提取物3g；牛肝浸粉5g；D-葡萄糖2g；赤蘚糖醇0.1g；枸櫞酸鈉0.2g；特級馬血清6ml；桿菌肽15單位/ml；放線菌酮150ug/ml；余量的蒸餾水或雙蒸水。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任意一項所述的一種用于分離旱獺組織中布魯氏菌的培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，具體包括如下步驟：

步驟一：稱取上述比例的瓊脂、胰蛋白月示、氯化鈉、無水亞硫酸鈉、酵母提取物、牛肝浸粉加入蒸餾水或雙蒸水中混合至1000mL，得混合物；

步驟二：將所得到的上述混合物煮沸、沉淀、過濾，取上清液，備用；

步驟三：向步驟二所述的上清液中加入上述比例的D-葡萄糖、赤蘚糖醇、枸櫞酸鈉，充分混勻，用上述比例的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)混合物的pH值為7.0～7.2，然后將混合物封裝于潔凈、干燥的燒瓶中，116～121℃條件下高壓滅菌20～30min；

步驟四：待高壓滅菌后的混合物冷卻至50～60℃時，在無菌條件下加入滅菌后的特級馬血清、桿菌肽及放線菌酮，輕輕旋轉(zhuǎn)燒瓶中的混合物，待混勻后將燒瓶中的液體于無菌條件下快速傾倒至滅菌后的平皿中，每一個平皿中傾倒液體12～18ml；

步驟五：平皿平放于室溫中隔夜，次日觀察平皿中所述液體是否成固體、是否生長菌落；若觀察到不生長任何菌落的固體物時，即為制備合格的上述培養(yǎng)基，于2～8℃條件下冷藏，備用。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-4任意一項所述的一種用于分離旱獺組織中布魯氏菌的培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，所述特級馬血清是血漿中除去纖維蛋白分離出液體或指纖維蛋白已被除去的血漿。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-4任意一項所述的一種用于分離旱獺組織中布魯氏菌的培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，所述胰蛋白月示是采用動物組織、混合蛋白、經(jīng)生物酶消化而制成的。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-4任意一項所述的一種用于分離旱獺組織中布魯氏菌的培養(yǎng)基培養(yǎng)布魯氏菌的方法，其特征在于，具體步驟包括如下：

培養(yǎng)溫度為恒溫37℃，對培養(yǎng)氣氛沒有特別限制，只要布魯氏菌的生長沒有受到明顯抑制即可，可以向培養(yǎng)氣氛中引入二氧化碳以增加其濃度，其中，引入二氧化碳的量為5～10％；培養(yǎng)時間達到布魯氏菌的水平生長即可，即5～60天。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種用于分離旱獺組織中布魯氏菌的培養(yǎng)基培養(yǎng)布魯氏菌的方法，其特征在于，所述引入二氧化碳的量為5％；培養(yǎng)時間達到布魯氏菌的水平生長即可，即5～25天。