[發明專利]檢測基因甲基化的引物、試劑和試劑盒

有效

• 申請號: 202110412787.2
• 申請日: 2021-04-16
• 公開（公告）號: CN112852934B
• 公開（公告）日: 2022-02-18
• 發明（設計）人: 吳亞;邱宇;鄧魏鑫;王維旭;張喆
• 申請（專利權）人: 武漢友芝友醫療科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 周文波

1.一種用于檢測基因甲基化的引物，其特征在于，其具有依次連接的如下區域：前互補區、第一錯配區、中互補區、第二錯配區以及后互補區；

其中，所述前互補區、所述中互補區以及所述后互補區與模板序列互補且每個互補區均覆蓋CpG位點；所述第一錯配區和所述第二錯配區與模板序列不互補且不形成發卡結構；所述第一錯配區的長度為4-7nt；所述第二錯配區的長度為1-5nt；所述前互補區的長度為13-15nt；所述中互補區的長度為7-11 nt；所述后互補區的長度為1-4 nt。

2.根據權利要求1所述的引物，其特征在于，所述前互補區、所述中互補區以及所述后互補區中的每個互補區的5’端覆蓋CpG位點。

3.根據權利要求2所述的引物，其特征在于，所述前互補區、所述中互補區以及所述后互補區中的每個互補區的5’端的第一位堿基為C。

4.一種檢測SDC2基因甲基化的引物組，其特征在于，其包括如下引物組合中的任意一種或多種：引物組合1、引物組合2和引物組合3；

其中，引物組合1包括：SEQ ID NO.1所示的上游引物和SEQ ID NO.3所示的下游引物；

引物組合2包括：SEQ ID NO.4所示的上游引物和SEQ ID NO.6所示的下游引物；

引物組合3包括：SEQ ID NO.7所示的上游引物和SEQ ID NO.9所示的下游引物。

5.根據權利要求4所述的引物組，其特征在于，所述引物組合1還包括如SEQ ID NO.2所示的特異性探針1。

6.根據權利要求4所述的引物組，其特征在于，所述引物組合2還包括如SEQ ID NO.5所示的特異性探針2。

7.根據權利要求4所述的引物組，其特征在于，所述引物組合3還包括如SEQ ID NO.8所示的特異性探針3。

8.根據權利要求5~7任一項所述的引物組，其特征在于，所述特異性探針1、所述特異性探針2或所述特異性探針3各自的兩端分別帶有熒光報告基團和熒光淬滅基團。

9.根據權利要求8所述的引物組，其特征在于，所述熒光報告基團選自FAM、VIC、ROX、CY3或CY5中的任意一種。

10.根據權利要求8所述的引物組，其特征在于，所述熒光淬滅基團選自TAMRA、BHQ1、BHQ2或NFQ中的任意一種。

11.根據權利要求8所述的引物組，其特征在于，所述特異性探針1、所述特異性探針2或所述特異性探針3各自還連接有MGB修飾基團，所述MGB修飾基團與所述熒光淬滅基團連接。

12.一種檢測SDC2基因甲基化的方法，其特征在于，其包括：將權利要求4~11任一項所述的引物組與待測樣本的核酸模板置于PCR反應體系中進行PCR擴增；所述方法不以疾病的診斷或治療為直接目的。

13.根據權利要求12所述的方法，其特征在于，在所述PCR反應體系中，當存在特異性探針時；上游引物、下游引物以及特異性探針的濃度比為0.1μM-0.5μM：0.1μM-0.5μM：0.1μM-0.2μM。

14.根據權利要求12或13所述的方法，其特征在于，進行PCR擴增的條件如下：36-38℃、9-11 min；94-96℃、4-6 min；94-96℃、4-6 s，58-63℃、59-61 s，44-46個循環。

15.一種檢測SDC2基因甲基化的試劑或試劑盒，其特征在于，其包括權利要求4~11任一項所述的引物組。