[發明專利]橡膠樹乳管網絡的分離方法和研究方法

在審

• 申請號: 202110411926.X
• 申請日: 2021-04-16
• 公開（公告）號: CN113375989A
• 公開（公告）日: 2021-09-10
• 發明（設計）人: 譚德冠;張家明;付莉莉;馬帥;孫雪飄;韓冰瑩
• 申請（專利權）人: 中國熱帶農業科學院熱帶生物技術研究所
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/36;G01N1/30;G01N23/04;G01N23/20
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 李偉

1.一種橡膠樹乳管網絡的分離方法，其特征在于，包括以下步驟：

將橡膠樹樹皮樣品采用固定液進行固定，再將得到的橡膠樹樹皮樣品采用酶解液進行酶解；

以100mL酶解液為基準，所述酶解液中包括2～3wt％的纖維素酶、2～3wt％的果膠酶、2～3wt％的離析酶、2～3wt％的崩潰酶、9～13wt％的甘露醇。

2.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于，所述固定液為75％的乙醇或4％的戊二醛。

3.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于，所述固定的過程具體為：

將橡膠樹樹皮樣品置于固定液，在壓力為350mm條件下真空抽氣15～35min，再固定3～5h。

4.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于，所述酶解前還包括：

將固定后的橡膠樹樹皮樣品采用PBS緩沖液沖洗3～4次，每次10～15min。

5.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于，所述酶解液中包括2wt％的纖維素酶、2w％的果膠酶、2wt％的離析酶、2wt％的崩潰酶、9wt％的甘露醇。

6.根據權利要求1或5所述的分離方法，其特征在于，所述酶解液的pH為6.0～6.5。

7.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于，所述酶解的溫度為40～50℃，轉速為60～70rmp，時間為12～24h。

8.一種橡膠樹乳管網絡的研究方法，包括以下步驟：

將橡膠樹樹皮樣品采用固定液進行固定，再將得到的橡膠樹樹皮樣品采用酶解液進行酶解；

將酶解得到的橡膠樹乳管網絡進行顯微研究或超微研究；

以100mL酶解液為基準，所述酶解液中包括2～3wt％的纖維素酶、2～3wt％的果膠酶、2～3wt％的離析酶、2～3wt％的崩潰酶、9～13wt％的甘露醇。

9.根據權利要求8所述的研究方法，其特征在于，所述顯微研究是將酶解得到的橡膠樹乳管網絡依次經30％、50％、70％、80％、90％、100％的乙醇室溫下逐級脫水，每級脫水時間為15min，再經乙醇醋酸混合液、醋酸各處理20min，溴碘溶液染色2min后置于顯微鏡下觀察。

10.根據權利要求8所述的研究方法，其特征在于，所述超微研究是將酶解得到的橡膠樹乳管網絡依次經0％、50％、70％、80％、90％丙酮4℃下逐級脫水，每級15min，再用無水丙酮脫水3次，每次20min，將得到的橡膠樹乳管網絡放入包埋液進行滲透與聚化，切成50nm薄片載于鎳網中，用1％醋酸雙氧鈾室溫下染色20min，雙蒸水清洗3次，每次5min，再用檸檬酸鉛染色液室溫下染色15min，雙蒸水清洗3次，每次5min，烤干切片，透射電鏡下觀察。