[發明專利]一種具有抗氧化和ACE抑制功能的大豆蛋白肽及其制備方法

有效

• 申請號: 202110411771.X
• 申請日: 2021-04-16
• 公開（公告）號: CN113215212B
• 公開（公告）日: 2022-09-27
• 發明（設計）人: 劉懷高;羅永康;周媛媛;崔景林;張恒
• 申請（專利權）人: 國肽生物工程（常德）有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/20;C07K1/34;A61K38/01;A61P39/06;A61P43/00;A23L33/185
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 張璐

1.一種大豆蛋白肽，其特征在于，其制備方法包括：以大豆分離蛋白為原料，經熱變性處理后，在進行兩步酶解制得酶解物；

所述兩步酶解中，第一步酶解使用的酶為酶活為50,000-500,000U/g的堿性蛋白酶，第二步使用的酶為復合蛋白酶，所述復合蛋白酶為酶活為100,000-650,000U/g的中性蛋白酶和酶活為80,000-250,000U/g風味蛋白酶；

所述大豆蛋白肽含有質量百分含量≥50％的功能肽，所述功能肽的序列如SEQ IDNO.1～3任一所示。

2.根據權利要求1所述的大豆蛋白肽，其特征在于，所述復合蛋白酶中，中性蛋白酶和風味蛋白酶的質量之比為1-2:1。

3.根據權利要求1或2所述的大豆蛋白肽，其特征在于，所述第一步酶解中，以原料蛋白的質量為基準，堿性蛋白酶的用量為0.5-1.0％，酶解條件為pH為8～10、40～70℃酶解30～60min；

所述第二步酶解中，以原料蛋白的質量為基準，復合蛋白酶的用量為1.0-2.0％，酶解條件為40～70℃酶解3-7h。

4.根據權利要求1或2所述的大豆蛋白肽，其特征在于，所述熱變性處理包括：將大豆分離蛋白與水混合后，在90～110℃下保溫30-60min。

5.根據權利要求3所述的大豆蛋白肽，其特征在于，所述熱變性處理包括：將大豆分離蛋白與水混合后，在90～110℃下保溫30-60min。

6.根據權利要求1、2、5中任一項所述的大豆蛋白肽，其特征在于，所述制備方法還包括：從所述酶解物中分離得到分子量小于2000道爾頓的蛋白肽液，而后進行目標肽的分離；

所述目標肽的分離包括：

將所述分子量小于2000道爾頓的蛋白肽液經SephadexG-15凝膠分離，洗脫液為去離子水，洗脫峰在280nm下進行檢測，收集第2個洗脫峰；再用RP-HPLC反相高效液相色譜進行分離，分離條件如下：采用C18色譜柱，以含0.1％TFA的水溶液為流動相A，含0.1％TFA的乙腈溶液為流動相B，采用梯度洗脫進行分離：0-5min，5％的流動相B；5-45min，5-45％的流動相B；45-55min，45-5％的流動相B，流速為1mL/min；收集9～13分鐘分離的蛋白肽溶液。

7.根據權利要求3所述的大豆蛋白肽，其特征在于，所述制備方法還包括：從所述酶解物中分離得到分子量小于2000道爾頓的蛋白肽液，而后進行目標肽的分離；

所述目標肽的分離包括：

將所述分子量小于2000道爾頓的蛋白肽液經SephadexG-15凝膠分離，洗脫液為去離子水，洗脫峰在280nm下進行檢測，收集第2個洗脫峰；再用RP-HPLC反相高效液相色譜進行分離，分離條件如下：采用C18色譜柱，以含0.1％TFA的水溶液為流動相A，含0.1％TFA的乙腈溶液為流動相B，采用梯度洗脫進行分離：0-5min，5％的流動相B；5-45min，5-45％的流動相B；45-55min，45-5％的流動相B，流速為1mL/min；收集9～13分鐘分離的蛋白肽溶液。

8.根據權利要求4所述的大豆蛋白肽，其特征在于，所述制備方法還包括：從所述酶解物中分離得到分子量小于2000道爾頓的蛋白肽液，而后進行目標肽的分離；

所述目標肽的分離包括：

將所述分子量小于2000道爾頓的蛋白肽液經SephadexG-15凝膠分離，洗脫液為去離子水，洗脫峰在280nm下進行檢測，收集第2個洗脫峰；再用RP-HPLC反相高效液相色譜進行分離，分離條件如下：采用C18色譜柱，以含0.1％TFA的水溶液為流動相A，含0.1％TFA的乙腈溶液為流動相B，采用梯度洗脫進行分離：0-5min，5％的流動相B；5-45min，5-45％的流動相B；45-55min，45-5％的流動相B，流速為1mL/min；收集9～13分鐘分離的蛋白肽溶液。