[發(fā)明專利]一種工程細(xì)胞株FCHO/IL-24的無血清懸浮培養(yǎng)馴化方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110411663.2
• 申請日: 2021-04-16
• 公開（公告）號: CN113337473A
• 公開（公告）日: 2021-09-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 江紅;鄭曉飛;馬群風(fēng);化計磊;侯玲玲;葛建林;劉夢喆;王雨琪;韋月仙
• 申請（專利權(quán)）人: 北京交通大學(xué)
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務(wù)所 11430
• 代理人: 李玉娜;范盈

本發(fā)明公開了一種工程細(xì)胞株FCHO/IL?24的無血清懸浮培養(yǎng)馴化方法，包括以下步驟：(1)通過梯度降低血清濃度，馴化工程細(xì)胞株FCHO/IL?24能夠在0.5％血清貼壁條件下培養(yǎng)；(2)將步驟(1)得到的工程細(xì)胞株FCHO/IL?24直接從0.5％血清貼壁培養(yǎng)馴化為0.5％血清懸浮培養(yǎng)；(3)將步驟(2)得到的工程細(xì)胞株FCHO/IL?24在無血清培養(yǎng)基中懸浮培養(yǎng)。本申請通過梯度降低血清濃度，先馴化工程細(xì)胞株FCHO/IL?24能夠在0.5％血清貼壁條件上培養(yǎng)，再進(jìn)行懸浮培養(yǎng)，最后使其能夠在無血清培養(yǎng)基中懸浮培養(yǎng)，不僅能保持較高的細(xì)胞密度，同時還能穩(wěn)定分泌表達(dá)rhIL?24，為后續(xù)的懸浮培養(yǎng)條件和無血清培養(yǎng)基成份的優(yōu)化奠定了基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種工程細(xì)胞株FCHO/IL-24的無血清懸浮培養(yǎng)馴化方法。

背景技術(shù)

癌癥是嚴(yán)重威脅人類健康的惡性疾病，位居世界十大死亡原因之首。雖然醫(yī)學(xué)技術(shù)進(jìn)步提高了實體腫瘤手術(shù)切除率，加之不斷涌現(xiàn)的各種化療和靶向藥物，使得腫瘤患者五年存活率有所提高，也明顯改善了患者的生活質(zhì)量，但腫瘤細(xì)胞惡性浸潤轉(zhuǎn)移生長特性引起的復(fù)發(fā)，以及抗腫瘤藥物耐藥性和對正常細(xì)胞的損傷，使得腫瘤患者必須要忍受嚴(yán)重的藥物毒副作用，否則只能被迫停止治療。這就急迫需要發(fā)展毒性小、特異性強、療效好的治療方法，以有效控制腫瘤惡性進(jìn)程，尋找能夠特異性消滅惡性腫瘤細(xì)胞、且對正常細(xì)胞無毒副作用的抗腫瘤藥物，一直是腫瘤生物學(xué)的研究熱點。

極為有意義的是，1995年Jiang等人首次報告黑色素瘤分化相關(guān)基因-7/白細(xì)胞介素24 (mda-7/IL-24)能抑制黑色素瘤細(xì)胞增殖，編碼一種206個氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)，分子量大約23.8kDa。后續(xù)研究發(fā)現(xiàn)，IL-24具有廣譜而特異的抗瘤活性，它能夠在體內(nèi)外特異性地抑制多種腫瘤生長，并選擇性誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，對正常細(xì)胞幾乎沒有影響，不依賴于p53、 p21、Rb等基因的表達(dá)水平，與其他抑瘤基因明顯不同。同時，IL-24具有刺激機體抗腫瘤免疫反應(yīng)的能力，它不僅能刺激外周血單核細(xì)胞分泌產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子，如IL-6、IL-1β、IL-12、 GM-CSF和IFN-γ等，還能增加CD3⁺CD8⁺T細(xì)胞數(shù)量，從而觸發(fā)機體產(chǎn)生抑制原發(fā)部位腫瘤細(xì)胞和轉(zhuǎn)移部位腫瘤細(xì)胞的免疫反應(yīng)，這是p53和Rb等抑癌基因所不具備的特點。而且， IL-24可以增強腫瘤細(xì)胞放化療敏感性，與靶向藥物、化療藥物或放療聯(lián)用可產(chǎn)生疊加或協(xié)同的抗瘤效果。正因為上述的特點，IL-24被稱為治療腫瘤的“神奇子彈”，對其進(jìn)行深入研究不僅具有重要的理論意義，而且具有重大的臨床應(yīng)用價值。