[發明專利]一種工程細胞株FCHO/IL-24的無血清懸浮培養馴化方法

在審

• 申請號: 202110411663.2
• 申請日: 2021-04-16
• 公開（公告）號: CN113337473A
• 公開（公告）日: 2021-09-03
• 發明（設計）人: 江紅;鄭曉飛;馬群風;化計磊;侯玲玲;葛建林;劉夢喆;王雨琪;韋月仙
• 申請（專利權）人: 北京交通大學
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務所 11430
• 代理人: 李玉娜;范盈

1.一種工程細胞株FCHO/IL-24的無血清懸浮培養馴化方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)通過梯度降低血清濃度，馴化工程細胞株FCHO/IL-24能夠在0.5％血清貼壁條件下培養；

(2)將步驟(1)得到的工程細胞株FCHO/IL-24直接從0.5％血清貼壁培養馴化為0.5％血清懸浮培養；

(3)將步驟(2)得到的工程細胞株FCHO/IL-24在無血清培養基中懸浮培養。

2.根據權利要求1所述的工程細胞株FCHO/IL-24的無血清懸浮培養馴化方法，其特征在于，步驟(1)中所述工程細胞株FCHO/IL-24在0.5％血清貼壁條件下培養的基礎培養基為1640或DMEM/F12，優選為DMEM/F12。

3.根據權利要求2所述的工程細胞株FCHO/IL-24的無血清懸浮培養馴化方法，其特征在于，步驟(1)中所述梯度降低血清濃度為血清濃度從10％、5％、2％、1％到0.5％的梯度降低。

4.根據權利要求3所述的工程細胞株FCHO/IL-24的無血清懸浮培養馴化方法，其特征在于，步驟(1)具體為：將FCHO/IL-24工程細胞株在含10％血清的F12培養基中培養，每隔2天按照1:3傳代，傳代時更換為含10％血清的DMEM/F12培養基，連續傳代3次；然后將血清濃度降為5％，在5％血清條件下連續傳代7-8次；再降血清到2％，在2％血清濃度下傳代7-8次之后，將血清降低到1％，連續傳代培養10次后，細胞在含0.5％血清的DMEM/F12中培養，連續傳代12次；不同血清濃度下傳代間隔和傳代比例與10％血清的保持一致。

5.根據權利要求1所述的工程細胞株FCHO/IL-24的無血清懸浮培養馴化方法，其特征在于，步驟(2)中懸浮培養的接種密度為5×10⁵個細胞/mL。

6.根據權利要求5所述的工程細胞株FCHO/IL-24的無血清懸浮培養馴化方法，其特征在于，步驟(2)中懸浮培養的轉速為119rpm。

7.根據權利要求1所述的工程細胞株FCHO/IL-24的無血清懸浮培養馴化方法，其特征在于，步驟(3)中無血清培養基為Eden^TM-B300S或CDM4CHO，優選為Eden^TM-B300S。

8.根據權利要求1所述的工程細胞株FCHO/IL-24的無血清懸浮培養馴化方法，其特征在于，步驟(3)中懸浮培養的接種密度為5×10⁵個細胞/mL。

9.根據權利要求8所述的工程細胞株FCHO/IL-24的無血清懸浮培養馴化方法，其特征在于，步驟(3)中懸浮培養的轉速為119rpm。