[發明專利]檢測紅細胞表面有無不完全抗體的方法、系統及其應用

在審

• 申請號: 202110409606.0
• 申請日: 2021-04-15
• 公開（公告）號: CN113109561A
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發明（設計）人: 高明;陳玉平;陳芳芳;王布強;徐丹;門泉祿;徐孟靜
• 申請（專利權）人: 江蘇力博醫藥生物技術股份有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/68
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產權代理有限公司 11250
• 代理人: 廖慧敏

本發明涉及檢測紅細胞表面有無不完全抗體的方法、系統及其應用，屬于生物檢測技術領域。本發明提供了一種基于固相吸附的檢測紅細胞表面有無不完全抗體的方法，所述方法為將待檢測紅細胞和抗人球蛋白添加至包被有丙種球蛋白的容器中進行離心，離心結束后，觀察待檢測紅細胞在包被有丙種球蛋白的容器底部是否被吸附，若待檢測紅細胞在包被有丙種球蛋白的容器底部被吸附，則待檢測紅細胞表面有不完全抗體，若待檢測紅細胞在包被有丙種球蛋白的容器底部不被吸附，則待檢測紅細胞表面無不完全抗體；所述方法在保持較高的靈敏度和特異性的前提下，具有更低的檢測成本，且所述方法具有易于自動化操作的優勢，能避免操作過程中的人為誤差，提高工作效率。

技術領域

本發明涉及檢測紅細胞表面有無不完全抗體的方法、系統及其應用，屬于生物檢測領域。

背景技術

抗人球蛋白試驗(antiglobulin test)是1945年由Coombs創立的用于檢測受血者或者孕婦、新生兒血清(血漿)或紅細胞上有無IgM抗體之外的不完全血型抗體的技術，又稱Coombs試驗，其中，用于檢測紅細胞上除IgM抗體之外的其他不完全血型抗體的方法稱為直接抗人球試驗(Direct antiglubin test,DAT)。直接抗人球試驗用于評估受血者、孕婦、胎兒發生IgM之外的其他不完全血型抗體引起溶血的風險。

目前，通用的直接抗人球試驗是利用不完全抗體和紅細胞在抗人球蛋白介導下體外發生凝集反應的原理，常用的方法有試管法、微板法、微柱凝膠法等方法(試管法、微板法、微柱凝膠法均記載于《全國臨床檢驗操作規程》中)。其中，試管法和微板法是以不完全抗體與紅細胞在抗人球蛋白介導下形成的凝集塊的大小判斷凝集強度，從而達到檢測受檢者紅細胞是否被IgM之外的其他不完全血型抗體致敏的目的；微柱凝膠法是在凝膠中添加抗人球抗體，通過離心，紅細胞上吸附有IgG類血型抗體的會被阻滯在凝膠上層，形成一個紅細胞凝集條帶，沒有吸附IgG類血型抗體的紅細胞通過離心到達微柱底部，從而判斷紅細胞是否被IgG類血型抗體致敏。但是，這些方法均存在缺陷，例如：

試管法需要人工進行混勻的步驟，費時費力，并且，試管法在對凝集程度進行判定時需要晃動試管，力度對檢測結果易造成影響，同一份樣本不同的人可能會產生不同的判定結果，尤其是對于一些弱陽性樣本，容易產生人工誤差；

微板法抗體和紅細胞的加樣量和抗體批間差異會影響結果的穩定性；

微柱凝膠法在運輸過程中試劑凝膠容易變形和產生氣泡，氣溫對凝膠分子篩的大小也會產生影響，從而對最終檢測結果的穩定性和可靠性產生影響。

發明內容

為解決上述問題，本發明提供了一種檢測紅細胞表面有無不完全抗體的方法，所述方法包含檢測步驟；所述檢測步驟為：將待檢測紅細胞和抗人球蛋白添加至包被有丙種球蛋白的容器中進行離心，離心結束后，觀察待檢測紅細胞在包被有丙種球蛋白的容器底部是否被吸附，若待檢測紅細胞在包被有丙種球蛋白的容器底部被吸附，則待檢測紅細胞表面有不完全抗體，若待檢測紅細胞在包被有丙種球蛋白的容器底部不被吸附，則待檢測紅細胞表面無不完全抗體。

在本發明的一種實施方式中，所述丙種球蛋白為人血丙種球蛋白。人血丙種球蛋白是從人血液中純化的IgG類抗體，該抗體是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4的混合物。

在本發明的一種實施方式中，所述不完全抗體包含IgG1、IgG2、IgG3和/或IgG4。

在本發明的一種實施方式中，所述離心的轉速為90～360g、時間為1～30min。

在本發明的一種實施方式中，所述離心的轉速為190～360g、時間為1～3min。

在本發明的一種實施方式中，所述檢測步驟前，還包含稀釋步驟；所述稀釋步驟為：將待檢測紅細胞稀釋至濃度為0.3～1％。

在本發明的一種實施方式中，所述稀釋步驟為：用Liss(低離子強度溶液)或生理鹽水將待檢測紅細胞稀釋至濃度為0.3～1％。