[發明專利]一種煙草青枯病菌快速免疫檢測試紙條及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110407113.3
• 申請日: 2021-04-15
• 公開（公告）號: CN113189331B
• 公開（公告）日: 2023-07-18
• 發明（設計）人: 王曉強;袁源;王鳳龍;任廣偉;王東坤;李藝池;王文靜
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院煙草研究所(中國煙草總公司青州煙草研究所)
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/577;G01N33/58;G01N33/558;G01N33/532
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 宋海海

本發明提供一種煙草青枯病菌快速免疫檢測試紙條及其制備方法和應用，屬于生物檢測技術領域。所述試紙條包含抗煙草青枯病菌單克隆抗體，其中，所述抗煙草青枯病菌單克隆抗體的重鏈可變區包含如SEQ?ID?NO.1所示的氨基酸序列，其輕鏈可變區包含如SEQ?ID?NO.2所示的氨基酸序列。本發明通過對現有檢測煙草青枯病菌的膠體金試紙條進行改良優化，從而成功制備得到一種具有特異性強、靈敏度高、操作簡便、反應快速等優點的煙草青枯病菌快速免疫檢測試紙條，因此具有良好的實際應用之價值。

技術領域

本發明屬于生物檢測技術領域，具體涉及一種煙草青枯病菌快速免疫檢測試紙條及其制備方法和應用。

背景技術

公開該背景技術部分的信息僅僅旨在增加對本發明的總體背景的理解，而不必然被視為承認或以任何形式暗示該信息構成已經成為本領域一般技術人員所公知的現有技術。

由青枯勞爾氏菌(Ralstonia?solanacearum)引起的細菌性青枯病是一種毀滅性土傳病害。除了侵染茄科作物，R.solanacearum還可以侵染50多個科的200多種植物，是煙草、番茄、辣椒、茄子、生姜、馬鈴薯、花生、草莓和香蕉等農作物產量和品質的重要限制因素。由于其寄主范圍廣且防治困難，因此被稱為植物的“癌癥”。由于缺乏有效的防治藥劑，在我國農用硫酸鏈霉素一直被用來青枯病的防治，而隨著我國停止使用農用硫酸鏈霉素，植物青枯病的防治面臨巨大挑戰。

對煙草青枯病菌的準確、快速檢測是對煙草青枯病執行防控措施的重要前提。目前，對該病原菌的檢測主要是在基因分子水平對病原菌進行檢測，包括PCR等。基因分子水平檢測技術具有準確、靈敏的優勢，但需要較為嚴格的實驗條件、措施及操作，不能完全滿足現存快速檢驗檢疫的需求。因此，建立對煙草青枯病菌現場快速、準確的輕簡型檢測方法對嚴格執行防控措施具有極大的現實意義。

膠體金免疫層析試紙條由于其快速便捷、操作簡單、成本低、性能穩定等特點而備受關注。以膠體金顆粒為標記物，利用抗原-抗體的特異性反應，通過裸眼可見的顏色反應來檢測目標分析物。因此，膠體金免疫層析試紙條對病原物的現場快速檢測具有重要意義。發明人發現，現有技術中已經有檢測煙草青枯病菌的膠體金試紙條，然而，其普遍存在檢測靈敏度低、特異性差、檢測時間長等缺陷，從而影響其實際應用。

發明內容

針對現有技術存在的問題，本發明提供一種煙草青枯病菌快速免疫檢測試紙條及其制備方法和應用。本發明通過對現有檢測煙草青枯病菌的膠體金試紙條進行改良優化，從而成功制備得到一種具有特異性強、靈敏度高、操作簡便、反應快速等優點的煙草青枯病菌快速免疫檢測試紙條，因此具有良好的實際應用之價值。

具體的，本發明涉及以下技術方案：

本發明的第一個方面，提供一種煙草青枯病菌快速免疫檢測試紙條，所述試紙條按照常規膠體金試紙條設置，所述試紙條包含抗煙草青枯病菌單克隆抗體，其中，所述抗煙草青枯病菌單克隆抗體的重鏈可變區包含如SEQ?ID?NO.1所示的氨基酸序列，其輕鏈可變區包含如SEQ?ID?NO.2所示的氨基酸序列。

具體的，所述抗煙草青枯病菌單克隆抗體的重鏈可變區的氨基酸序列具有與SEQID?NO.1相比至少80％的同源性；更優選地，具有至少90％的同源性；最優選地，具有至少95％的同源性；如具有至少96％、97％、98％、99％的同源性。

所述抗煙草青枯病菌單克隆抗體的輕鏈可變區的氨基酸序列具有與SEQ?ID?NO.1相比至少80％的同源性；更優選地，具有至少90％的同源性；最優選地，具有至少95％的同源性；如具有至少96％、97％、98％、99％的同源性。

本發明的又一具體實施方式中，所述煙草青枯病菌快速免疫檢測試紙條包括：底板，所述底板上依次設置有吸水墊、檢測墊、金標墊和樣品墊，相鄰各墊在連接處交疊連接。

其中，