[發明專利]一種穩定的酸性成纖維細胞生長因子制劑及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202110406503.9
• 申請日: 2021-04-15
• 公開（公告）號: CN113274486A
• 公開（公告）日: 2021-08-20
• 發明（設計）人: 王書生;曲榮川;鮑師兵;林斌
• 申請（專利權）人: 上海騰瑞制藥股份有限公司
• 主分類號: A61K38/18
• 分類號: A61K38/18;A61K9/08;A61K9/19;A61K47/18;A61K47/26;A61K47/36;A61K47/42;A61P17/02;C07K14/50;C12N15/70
• 代理公司: 上海申新律師事務所 31272
• 代理人: 郎祺

本發明涉及一種穩定的酸性成纖維細胞生長因子制劑及其制備方法和應用。該制劑包括酸性成纖維細胞生長因子、磷酸鹽緩沖液和穩定劑；其中，該酸性成纖維細胞生長因子的濃度為1000?100000U/ml；該磷酸鹽緩沖液的摩爾濃度為10?50mmmol/L；該穩定劑的質量體積百分比含量為0.01?30％(w/v)；該液態制劑的pH值為6.0?8.0。本發明提供的酸性成纖維細胞生長因子制劑中蛋白的穩定性好，以液態保存或者凍干后保存，均具有高度的穩定性及生物學活性；此外，該制劑的制備方法簡單，成本低廉，可在創傷皮膚的愈合和醫學美容等領域中大規模推廣。

技術領域

本發明涉及生物醫藥技術領域，尤其涉及一種穩定的酸性成纖維細胞生長因子制劑及其制備方法和應用。

背景技術

在蛋白產品中增加穩定劑是生物蛋白產品制劑研究的重點領域，是每種蛋白稱為藥品的關鍵技術，一種蛋白的生物學活性再好，若其穩定性很差，可以保存的時間很短，或者保存的條件非常苛刻，都不可能成為一種藥品而造福于人類。

成纖維細胞生長因子(FGFs)是由至少9種結構上相關的蛋白質(FGF1-9)組成的生長因子家族，其中了解最清楚的是酸性成纖維細胞生長因子(aFGF或稱FGF-1)和堿性成纖維細胞生長因子(bFGF或稱FGF-2)。已知FGF家族的成員均為中胚層和神經外胚層來源的各種類似細胞的有絲分裂原，并且這些因子還具有促進血管生成、神經軸突延伸、神經元再生和存活、骨或軟骨組織修復及成肌細胞分化等多種生物學功能。一般說來，FGF家庭各成員之間的核心序列存在有大約25-55％的氨基酸序列同源性，因此FGF家族可能具有共同的始祖基因。

一般說來aFGF和bFGF的共有化學特征使這些因子可與肝素鈉鹽緊密結合，但其中aFGF對肝素鈉鹽的親和性要比bFGF小，同時aFGF的等電點更偏酸性(pH5-7)。已知肝素鈉鹽可通過幾種方式調節FGF分子的功能，例如肝素鈉鹽或肝素鈉鹽樣分子可直接作用于FGF，激活或增強aFGF和bFGF的活性。另外，發明人研究發現，可溶性肝素鈉鹽的增效作用似乎對aFGF有選擇性，而且其強化aFGF活性的程度比bFGF大10倍。

酸性成纖維細胞生長因子(aFGF)以前主要由從牛垂體中提取，稱為牛酸性成纖維細胞生長因子；許多現有技術文獻已報道了以重組DNA技術生產aFGF的方法(例如參見Biotechnology 5：960，1987；J.Bio1.Chem.263：1 6471，1988；EP 0219052等)。

然而，無論是提取的牛酸性成纖維細胞生長因子，還是重組的人酸性成纖維細胞生長因子(rhaFGF)，在溶液狀態下均極不穩定，容易析出沉淀而丟失活性，因此通常需要將其凍干保存，該凍干制劑再復溶成溶液，也需要盡快使用，以避免活性丟失。長久以來，由于穩定性不能滿足要求，aFGF的液體制劑產品一直難以被作為藥物制劑推廣應用。因此對適用于aFGF的穩定劑進行研究，獲得穩定的aFGF藥物組合物，具有重要的意義；本領域迫切需要提供能保持酸性成纖維細胞生長因子長期穩定性的液態制劑。

此外，FGF的獨特的血管生成活性和細胞增殖活性使之特別適用于促進組織傷口，特別是深部傷口的愈合。。也有學者提出使用aFGF活性片段保護中樞神經元并改善腦功能的方法。然而，將aFGF應用于創傷皮膚的愈合和醫學美容尚未見報道。

發明內容

本發明針對現有技術的不足，提供了一種穩定的酸性成纖維細胞生長因子制劑及其制備方法和應用，對該制劑的各成分進行了研究，特別是選擇了不同穩定劑組合并對各穩定劑的配比做出比較，經過反復實驗研究，得到了穩定的含有酸性成纖維細胞生長因子的制劑。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：