[發(fā)明專利]一種制備全腦組織石蠟切片的方法與應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110405737.1
• 申請日: 2021-04-15
• 公開（公告）號(hào): CN113203618B
• 公開（公告）日: 2022-04-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 方美英;湯啟國;李貞;雒亞彪;薛明明;產(chǎn)舒恒;何帥涵;張浩;吳常信
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N1/30
• 分類號(hào): G01N1/30;G01N1/36;G01N33/53;G01N33/58;G01N21/64
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 孫怡

本發(fā)明涉及動(dòng)物組織包埋技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了一種制備全腦組織石蠟切片的方法與應(yīng)用。本發(fā)明的制備全腦組織石蠟切片的方法，在固定步驟所采用的固定液為含3.8?4.2％的甲醛和0.9?1.1％的戊二醛的固定液。本發(fā)明方法無論是組織的完整性、細(xì)胞的基本形態(tài)、HE染色后的效果等均十分理想。通過本發(fā)明獲得的腦組織石蠟切片為下一步對腦組織進(jìn)行HE染色、免疫熒光等實(shí)驗(yàn)提供了高質(zhì)量的保證，也為研究胚胎時(shí)期腦的發(fā)育以及有關(guān)神經(jīng)疾病的臨床診斷提供了符合要求的切片，具有重要的科學(xué)意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及動(dòng)物組織包埋技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種制備全腦組織石蠟切片的方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

腦作為最重要的組織器官之一，一直以來是生物醫(yī)學(xué)研究的重點(diǎn)與難點(diǎn)。許多疾病與腦組織的病變有關(guān)，例如一些神經(jīng)退行性疾病腦損傷(BI)、阿爾茨海默病(AD)、帕金森病(PD)等，目前的醫(yī)學(xué)技術(shù)對一些腦部疾病仍然束手無策。病理切片是觀察病理變化，作出病理診斷，為臨床診斷和治療提供幫助的有效手段。如何獲得高質(zhì)量的病理切片就變得至關(guān)重要。

影響切片制作質(zhì)量的因素很多，包括取材、固定液的選擇、切片的存儲(chǔ)等。固定是切片制作的關(guān)鍵步驟之一，固定液的選擇極其重要，只有在固定過程中對樣品進(jìn)行良好的處理才能保證獲得高質(zhì)量的切片。

目前在腦組織的固定中常常使用4％甲醛作為固定液。但在胚胎發(fā)育的不同時(shí)期，由于腦的組織形態(tài)變化快速，僅以該固定液對胚胎所有時(shí)期的腦組織進(jìn)行固定，效果并不理想。而在其他組織切片制作過程中固定液的使用主要還有Carnoy固定液、添加一定量戊二醛固的4％甲醛固定液等。但由于動(dòng)物組織固定時(shí)，不同組織的生理學(xué)特性差異巨大，尤其是腦組織結(jié)構(gòu)主要是神經(jīng)細(xì)胞和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，具有含水較豐富、質(zhì)地較軟、結(jié)構(gòu)疏松、韌性低、極易自溶等獨(dú)有的特點(diǎn)，因此也無法直接借鑒現(xiàn)有固定其他組織的方案。

鑒于切片在研究腦病理變化中的重要作用，如果能夠找到一種適合各個(gè)時(shí)期胚胎腦組織的固定液和切片制作方法將有很大的實(shí)際意義，對于更好的研究腦部發(fā)育或者相關(guān)病理情況大有裨益。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決現(xiàn)有技術(shù)中的問題，本發(fā)明的目的是提供一種能夠適合胚胎發(fā)育不同時(shí)期的腦組織的固定液及切片制作方法，以解決因胚胎腦組織固定不理想等問題所導(dǎo)致的切片質(zhì)量不佳的問題。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的發(fā)明目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種制備全腦組織石蠟切片的方法，在固定步驟所采用的固定液為含3.8-4.2％的甲醛和0.9-1.1％的戊二醛的固定液。

優(yōu)選，所述固定液為含4％的甲醛和1％的戊二醛的固定液。

本發(fā)明根據(jù)全腦組織的生理學(xué)和結(jié)構(gòu)特性，尤其是關(guān)注各胚胎發(fā)育時(shí)期全腦組織變化，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)了一種可獲得各發(fā)育時(shí)期效果理想的石蠟切片的固定液及石蠟切片制備方法。

本發(fā)明中，在脫水步驟，用于脫水的乙醇濃度梯度依次為20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、100％、100％。

本發(fā)明中，所述脫水步驟具體為：以20％的乙醇處理55-65分鐘，以30％的乙醇處理55-65分鐘，以40％的乙醇處理55-65分鐘，以50％的乙醇處理55-65分鐘，以60％的乙醇處理55-65分鐘，以70％的乙醇處理9-10小時(shí)，以80％的乙醇處理55-65分鐘，以90％的乙醇處理55-65分鐘，以95％的乙醇處理55-65分鐘，以無水乙醇處理28-32分鐘，再以更換后的無水乙醇再次處理28-32分鐘。

優(yōu)選，所述脫水步驟具體為：以20％的乙醇處理1小時(shí)，以30％的乙醇處理1小時(shí)，以40％的乙醇處理1小時(shí)，以50％的乙醇處理1小時(shí)，以60％的乙醇處理1小時(shí)，以70％的乙醇處理10小時(shí)，以80％的乙醇處理1小時(shí)，以90％的乙醇處理1小時(shí)，以95％的乙醇處理1小時(shí)，以無水乙醇處理0.5小時(shí)，再以更換后的無水乙醇再次處理0.5小時(shí)。